论文部分内容阅读
目的:单核巨噬细胞系统是机体重要的免疫防御屏障,由单核细胞、各组织中的巨噬细胞以及原单核和幼单核细胞组成,这些细胞均属单核细胞系列,来自骨髓的造血干细胞。巨噬细胞是该系统的效应细胞,随所在部位不同而命名各异,如:肝内的Kupffer细胞、脑内的小胶质细胞等。巨噬细胞具有吞噬作用、杀伤肿瘤细胞作用、特异性免疫应答中抗原提呈作用、激活和调节免疫应答等各种功能。上皮-间质转化(EMT)是上皮细胞经历表型变化并发展成间质/SM样细胞的过程。类似地,内皮细胞(ECs)可以获得间质或SM样表型,该过程被称为内皮-间质转化(EndMT)。EndMT最初描述于心脏瓣膜形成的生理学过程中。随后发现EndMT也可发生于不同器官,如肾脏,肝脏和心脏,纤维化疾病患者,以及糖尿病患者和转移性肿瘤。最终成为许多不同病理的关键驱动因素,其特征是内皮细胞表面标志物如血小板内皮细胞粘附分子-1(PECAM-1/CD31)和血管内皮钙粘蛋白(VE-cadherin)下调,间质细胞表面标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌22α(SM22α)、波形蛋白、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)和ECM蛋白如纤连蛋白(FN)和胶原蛋白上调。Hippo通路是一条进化非常保守的信号通路,主要由串联激酶MST,LATS以及下游的共转录激活因子YAP/TAZ构成。YAP/TAZ作为共转录因子,入核后与其它转录因子结合,调控下游靶基因的表达。对调控器官大小、组织稳态、肿瘤发生发展起着重要作用。蛋白激酶C(PKC)是细胞信号转导途径中的重要介质,具有多种不同的亚型分类,参与调控了广泛的生物学过程。CXCR4系CXC类趋化因子受体家族中的一员,可以与趋化因子CXCL12特异性结合。已知,两者形成的信号轴对多种细胞具有趋化作用,在造血干细胞的归巢、动员,癌细胞的转移,病毒感染,炎症性疾病等过程中发挥着重要的调节作用。在前期工作中,我们发现PKC激活剂PMA诱导的单核细胞向巨噬细胞分化过程中,发生了EndMT现象,同时Hippo通路被激活,CXCR4表达升高。我们将以该细胞分化为研究模型,探讨Hippo通路对EndMT及CXCR4表达的调控作用,为明确单核细胞浸润的具体机制提供理论依据。方法:以经典的体外诱导巨噬细胞分化(PMA法)为研究模型1.应用流式细胞术法检测分化前后细胞表面间质标志物的表达改变;2.Western blot法检测分化前后细胞内间质标志物的表达变化;3.罗丹明-鬼笔环肽对细胞骨架蛋白染色检测细胞形态改变;4.生物信息学分析基因间相互关联。结果:1.单核/巨噬细胞分化伴随着内皮标志物表达下降,间质标志物表达升高;2.PKC调控下游YAP1以及间质标志物的表达;3.单核/巨噬细胞分化中,YAP1影响了内皮、间质标志物的表达;4.YAP1调控趋化因子受体CXCR4的表达。结论:1.单核/巨噬细胞分化是一种特殊形式的内皮-间质转化;2.PKC/YAP信号轴调控CXCR4的表达。