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桃(Prunus persica L. Batsch)是我国水果过敏中较为常见的种类。国外已鉴定四类桃过敏原(Pru p1-Prup4)。但对于我国患者来讲,究竟是由哪种主要蛋白引发过敏缺乏深入的研究。本文主要研究桃过敏原提取物的制备方法,桃过敏原组分的单克隆抗体生产,相关基因在果实中表达差异,重组蛋白的理化和免疫活性鉴定以及桃过敏临床病例的血清免疫鉴定。分析了桃四类候选过敏基因家族成员在不同组织间的表达模式差异,鉴别主要表达成员,比较不同桃品种果实中关键基因的转录水平上表达量,与桃基因组序列中相关过敏基因数据进行比较分析。开展桃Pru p1三个不同成员的载体构建、大肠杆菌体外表达和纯化,鉴定纯化产物的理化性质、生理功能和免疫活性差异。首次收集中国桃过敏患者血清,分析患者主要过敏原组分和地区间差异,明确我国桃果实主要过敏原。主要结果如下：1、比较了四种缓冲液提取桃果皮总蛋白粗提物的效果,确定了Coca’s缓冲液适宜于桃蛋白粗提取物制备。该方法获得的产物在桃过敏患者体内进行皮肤点刺实验(SPT),初步确认其免疫活性。免疫印迹实验验证了桃主要过敏蛋白分子量为91kDa。以重组脂质转移蛋白(LTP, Prup3)为免疫原,成功制备鼠单克隆抗体,为桃提取物的标准化以及研究LTP在果实生长和发育中的功能奠定基础。2、在转录水平确认了在果实中表达的7个关键过敏基因成员,包括Pru p1.01, Pru p1.06B, Prup2.01A, Prup2.01B,Prup3.01, Prup4.01和口Pru p4.02。部分成员具有组织特异性,其中Pru p1.02仅在幼叶中表达,果肉中基本无Pru p3.01成员表达,并且Pru p3.02和Pru p3.03仅分别在幼叶和花药中表达。在11个桃品种中,Pru p1禾口Pru p2两个过敏基因家族的关键成员表达差异较大,而Pru p3和Pru p4差异较小。在桃基因组序列中新发现8个同源基因。Pru p1、Prup2和Pru p3家族的部分成员以基因簇的形式分布,物理距离分别为80Kb、1.57Mb和20Kb。3、成功应用大肠杆菌表达系统从上清中纯化到3个Prup1成员(Prup1.01, Prup1.02禾口Prup1.06B),从包涵体内纯化到1个成员(Prup1.03)。分子量质谱和MALDI-TOF/TOF肽段匹配实验确认了蛋白序列的正确性,圆二色谱显示正确的二级结构和微小差异。在pH3时三个成员RNA水解活性丧失,pH5时仅Pru p1.06B表现活性,玉米素可延缓Pru p1.01水解活性。3例Pru p1阳性血清的IgE结合和抑制实验表明,Pru p1.06B的免疫活性强于Pru p1.01,为新发现的同源异构过敏原。重组过敏蛋白可以进一步研究应用于诊断制剂产品开发。4、本研究共收集39例桃过敏患者血清,利用国际医学界认可的ImmunoCAP测定血清中结合Pru p1、Pru p3和口Pru p4的特异免疫球蛋白E (sIgE)含量,结果表明脂质转移蛋白(Pru p3)为中国桃过敏患者主要过敏原。南方以单独桃过敏为主,北方以蒿草花粉过敏伴发桃过敏为主。脂质转移蛋白(LTP)是桃和蒿草花粉过敏交叉反应的分子基础。