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牙周病是各国人群中常见的牙周组织疾病，我国成人中牙周病发病率高达73％。各类牙周病中，以牙周炎较为常见。牙周袋形成和牙槽骨吸收是牙周炎最主要的临床体症和病理改变。由于牙槽骨吸收是牙周炎患者牙齿松动甚至丧失的直接原因，因此阻断牙槽骨吸收、牙槽骨生物修复是目前牙周炎治疗中的研究热点。 众所周知，成骨细胞(osteoblast,OB)是骨形成过程中的主要功能细胞。大量研究结果表明，一氧化氮(nitric oxide,NO)是参与细胞增殖和分化的重要信使分子。NO介导细胞因子、机械应力、激素等对骨细胞的刺激效应，参与体内、外的骨组织改建。适宜的低浓度的NO能促进成骨，而高浓度NO则可对细胞产生毒性，抑制成骨。已有研究资料证实，病变牙周组织局部NO水平的增高，可影响牙槽骨吸收和牙槽骨的修复重建。因此，降低牙周组织NO水平，从而抑制NO的毒性作用，有助于提高牙周炎的疗效。 胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor,IGF)是多种细胞分泌的多肽类生长因子，可分为IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ。文献报道，IGFs具有多种复杂的生物学功能。IGF-Ⅱ除了能促进细胞增殖和分化外，还能延长细胞存活时间。IGF-Ⅱ能调节细胞NO水平，并具有细胞特异性，因而对不同细胞NO水平的调节作用有差异，甚至相反。如IGF-Ⅱ能促进大鼠L6E9肌细胞诱导型一氧化氮合酶 浙江大学硕士学位论文 中文翁歹 Onducible itric oxide Sylthase，iNOS）的表达，使 NO水平升高；但抑制大鼠血管平滑肌细胞和小鼠胰岛细胞oOS的表达，结果使NO水平降低，体现为抗NO细胞毒性、抗细胞凋亡作用。 然而，有关IGFll对成骨细胞NO水平的调节作用及其机制，尚未见国内外文献报道。我们研究IGFll对小鼠成骨细胞株MC3T3＊ 的增殖、存活效应及对NO水平的调节作用，以期为IGFll在阻断牙槽骨吸收及生物修复牙槽骨中的应用提供科学依据。 目的 探讨IGFll对小鼠成骨细胞的增殖和存活效应、NO水平的调节作用、iNOS和内皮型 NOSkndothelial nitric oxide Synthase，eNOS）mRNA转录水平的影响，以初步了解IGFll促成骨细胞增殖的分子机制。 方法 选用小鼠成骨细胞株MC3T3E 为IGF－11效应检测的细胞模型。在不同浓度、不同时间＊F－11作用MC3T3－EI细胞后，用噎哩蓝（MTT）比色法检测促细胞增殖及细胞活性的效应；用酶化学法检测细胞培养液上清中NO浓度；应用半定量反转录聚合酶链式反应hCVCfSC tfgnSCflpt1Oll polyffiCrAsC Chslflreaction，RTPCR）检测细胞 iNOS和 eNOS mRNA水平。 结果l．IGFJ 对MC3T3E 细胞增殖的浓度及时间效应 MTT法通过检测OD49。吸光值来反映细胞增殖程度，OD490吸光值大小与细胞数量成良好的正向线性关系。 细胞培养 8 h时，各 IGFJ组和对照组细胞之间的 OD490值均无显著性差异 （F＝0．992，P＞0＊5）。培养 24 h时：10 fig／mL和 100 fig／mL IGF－11组细胞的 OD49。值均高于对照组（q＝4．9262，P＜0＊5；q－7＊839，P＜0＊1），100 ＂g／mL IGF－11组细胞的 OD。。值也明显较 inglmL组为高（q－5．2326，P＜0刀1＼但 lug／mL IGFll组和对照组、lug／inL和 10 ＂g／thL IGF－11组、10 hL和 100 ＂g／ffiL IGF－11组之间的OD49。值无显著性差异（P＞0刀5入 细胞培养 48 h时，10 ＂g／ffiL IGFJ组与对照组、100 ＂g／thL IGFll组与对照组＊ 与 10 ＂g／ffiL IGF二组J0 ＂g／mL与 100ng／mLIGF二组之间的 OD们。值差异均有显著性（仟8．4933，ZO．4883，5．538O，11．9949，P＜O＊1），但In 咖L 2 浙江大学硕土学位论文 中文狰要IGF－11组和对照组之间的 OD49。值无显著性差异（P＞0刀5）。 细胞培养 72 h时，对照组与 inghL、10 ＂g／thL、100 ＂g／thL IGFJ组之间，lug／niL与10ng／thL以及10ng／inL与100ng／ffiLIGFll组之间的OD4to值均有显著性差异…叫．745413＊756，3o．4548，8．9102，16．7992，P＜O．01）。 上述结果提示，IGF－11能明显促进MC3T3E 细胞增殖，并具有显著的时间－剂量依赖性。2．IGF－11对MC3T3－EI存活的影响 培养 96 h时，镜下对照组和 lug／mL IGFll组的细胞数量较 72 h时明显减少，部分细胞的细胞膜皱缩，细胞突起变细、变短，细胞间隙增大，部分细胞脱落；10 ＂g／thL IGF－11组细胞数量无明显变化，但可见部分细胞间隙增大；100＂g／mL IGFll组细胞数仍有一定程度的增加，细胞接触更为紧密。 MTT法检测结果表明：培养96 h时，对照组J IGFll组细胞的OD490值均明显较培养 72 h时为低（t4．2876，尸＜0．of；t＝2．2669，P＜0刀5），10 ＂g／ffiLIGFll组则与培养 72 h时无明显差异（t＝0．0761，P＞0＊5），100 ＂g／ttiL IGF－11组甚至明显高于培养 72 h时的 OD49。值（po3．1686 P＜0刀 1X此与形态学观察结果相似。 上述结果提示，表明 100 ＂g／mL IGF