DAB2IP检测方法的建立及在不同临床中医证型肺癌中的应用

来源 :福建中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:aquabluesky
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目的:研发DAB2IP蛋白的荧光免疫层析检测试剂盒,探讨不同中医证型肺癌与DAB2IP蛋白表达量的相关性。方法:应用B细胞杂交瘤技术建立分泌抗人DAB2IP单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用鼠源性单克隆抗体亚型检测试剂盒鉴定单抗的亚类;体内诱生腹水法制备单抗;免疫亲和层析法纯化抗体;Western blot分析抗体特异性;荧光免疫层析法研制DAB2IP荧光免疫试剂盒;在此基础上,应用DAB2IP荧光免疫试剂盒检测不同临床中医证型肺癌中DAB2IP蛋白的表达。结果:获取两株稳定分泌抗人DAB2IP单抗的杂交瘤(2A4、2G8);鼠源性单克隆抗体亚型检测试剂盒鉴定2A4、2G8细胞株均属小鼠IgGl亚类;经体内诱生腹水法制备单抗,小鼠腹水形成的阳性率为95%以上,腹水的收获量平均为5.Oml/只小鼠;经免疫亲和层析法纯化后的抗体跑胶结果显示其分子量约为150kD; Western blot显示2A4单抗能与蛋白发生特异性反应,特异性良好;成功研制DAB2IP分子的荧光免疫层析检测试剂盒,灵敏度为ing/m1,精密度为6.08%,线性范围在1.00-500.00ng/mL,提示该检测系统具有良好的灵敏度、精密性和准确性。应用该试剂盒检测不同临床中医证型肺癌中的DAB21P分子的表达量,显示气阴两虚组与其它组间差别有显著性(P<0.05),具有明显统计学意义。结论:本研究成功制备了具有自主知识产权的两株抗人DAB2IP单抗和DAB2IP荧光免疫层析检测试剂盒。该试剂盒通过对血清中DAB2IP含量进行半定量分析,为其在肿瘤基础研究和临床中的应用提供了实验依据,为肺癌的靶向治疗提供了新的思路和途径。由于肺癌气阴两虚组与其它组在DAB2IP分子表达上存在显著差异(P<0.05),提示,采用望闻问切与现代免疫学方法相结合,可能使中医分型更加客观、更加深入,该研究对于中医证型现代化研究具有一定参考价值。
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