【摘 要】
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目的:探讨尼古丁（Nicotine;NIC）是否通过细胞凋亡和内质网应激（endoplasmic reticulum stress;ER stress）加重高糖刺激足细胞的损伤。方法:复苏后,将细胞置于含10%胎牛血清、100 IU/ml青霉素、100 UG/ml链霉素和4 ng/ml小鼠干扰素-γ的RPMI-1640培养基中,置于5%CO2培养箱中,33℃培养。当细胞密度达到80%时,用0.25
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目的:探讨尼古丁（Nicotine;NIC）是否通过细胞凋亡和内质网应激（endoplasmic reticulum stress;ER stress）加重高糖刺激足细胞的损伤。方法:复苏后,将细胞置于含10%胎牛血清、100 IU/ml青霉素、100 UG/ml链霉素和4 ng/ml小鼠干扰素-γ的RPMI-1640培养基中,置于5%CO2培养箱中,33℃培养。当细胞密度达到80%时,用0.25%的胰蛋白酶消化细胞,按需要传代。传代后,更换10%胎牛血清、100 IU/ml青霉素和100 UG/ml链霉素RPMI-1640培养基。细胞在37℃、5%CO2培养箱中培养2周。培养液大约每两天更换一次。等细胞分化成熟后分为4组:正常对照组（NC组）:含5.6mmol/LD-葡萄糖;高糖组（HG组）:含30mmol/LD-葡萄糖;尼古丁组（NIC组）:含 5.6mmol/LD-葡萄糖+0.8mmol/L 尼古丁;高糖+尼古丁组（NIC+HG 组）:含 30mmol/L D-葡萄糖+0.8mmol/L尼古丁。每组处理时间为24小时。使用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组细胞活性。用二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的产生。用FITCAnnexinv凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。免疫印迹法检测CHOP,Bip,Bcl-2,Bax的表达。结果:1.与NC组相比HG组细胞活力降低;NIC组细胞活力降低;HG+NIC组细胞活力更低。2.与NC组相比HG组细胞的R0S的表达增多;NIC组细胞的R0S表达增多;NIC+HG组R0S表达明显增多。3.与NC组相比HG组细胞凋亡增多;NIC组细胞的凋亡细胞增多:NIC+HG组细胞的凋亡细胞明显增多。4.与NC组相比,HG组和NIC组的CHOP,BIP,Bcl-2,Bax等蛋白的表达增加;HG+NIC组的CHOP,BIP,Bcl-2,Bax等蛋白的表达进一步增加,均具有统计学意义（均P<0.05）。结论:尼古丁可加重高糖诱导的足细胞损伤,这可能与尼古丁与高糖协同诱导内质网应激和凋亡有关
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