局部增加巩膜巨噬细胞对小鼠屈光发育的影响

来源 :温州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:caacmis487
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目的:轴性近视的主要病理变化是眼轴的过度延长,伴随后极部的巩膜变薄。迄今为止,对于这一病理变化的机制研究尚未得出清晰结果,因此对于近视以及其并发症尚缺乏有效的从病因上着手的防治措施。根据巨噬细胞在其他组织上的作用以及巩膜细胞外基质在近视中的作用,本研究尝试增加巩膜后极部的巨噬细胞,验证其在巩膜细胞外基质的重塑中是否存在作用,探索以及其对近视的影响。  方法:1增加小鼠巩膜上巨噬细胞。  1)制备小鼠巨噬细胞悬液。采用出生后6-8周龄野生型(Wild Type,WT)C57BL/6小鼠,以10%血清RPMI1640培养液灌洗小鼠腹腔,吸取灌洗液,培养贴壁除去其他细胞,制备高纯度的小鼠巨噬细胞悬液。采用3周龄野生型B6小鼠,球后注射自制悬液。  2)采用3周龄野生型B6小鼠,球后注射购买的小鼠MCP-1(单核巨噬细胞趋化因子)。  2观测小鼠屈光发育。将小鼠随机分为注射组,对照组和空白组,在上述注射实验后利用我们自行搭建的红外偏心验光仪(EIR)测定小鼠屈光度;自行创建的OCT测定小鼠眼轴长度、前房深度、晶体厚度和玻璃体腔深度及各屈光界面曲率.  3检测巩膜上巨噬细胞数量的改变。在上述实验结束时,分离小鼠巩膜,采用免疫荧光标记(F4/80)巨噬细胞,通过细胞计数的方法,可以比较三组巩膜后极部巨噬细胞数量的变化。  结果:1注射巨噬细胞后,各组双眼屈光度及眼轴长度,玻腔深度没有明显差异。直到第7周,注射组的对侧眼与实验眼相比出现相对的眼轴延长(实验眼 vs.对侧眼:2.79±0.01 vs.2.82±0.01,p<0.05,配对样本t检验)。注射MCP-1后,各组双眼屈光度及眼轴长度,玻腔深度没有明显差异。直到第6周,注射组的对侧眼与实验眼相比出现相对的眼轴延长(实验眼 vs.对侧眼:2.78±0.01vs.2.82±0.01,p<0.05,配对样本t检验)。  2注射后,巩膜铺片荧光染色显示小鼠各组的注射眼巩膜上的巨噬细胞明显增加,其对侧眼的巨噬细胞相对Normal组也有一定增加。  结论:增加巩膜上的巨噬细胞对小鼠屈光发育产生了一定影响,特别是对眼轴的生长。球后注射腹腔巨噬细胞4周后,以及注射巨噬细胞趋化因子MCP-13周后,实验眼的对侧眼都产生了眼轴延长的现象。同时,免疫荧光显示,两种方式下的注射眼和其对侧眼巩膜上的巨噬细胞相对正常小鼠都有增加,这其中的机制需要进一步探究。
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