【摘 要】
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目的:以高糖诱导的小鼠肾足细胞损伤为研究对象,研究复方仙草颗粒含药血清对肾足细胞标志蛋白nephrin及PERK-ATF4-CHOP信号通路的影响,从分子水平上阐述壮药复方仙草颗粒对高糖诱导下肾足细胞损伤的保护作用机制,以进一步揭示该方对于糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）的作用机制。方法:（1）将100只8周龄SD大鼠随机分为复方仙草颗粒高、中、低剂量给药组各20只和纯
【基金项目】
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2019年国家自然科学基金项目（项目批准号:81960913）
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目的:以高糖诱导的小鼠肾足细胞损伤为研究对象,研究复方仙草颗粒含药血清对肾足细胞标志蛋白nephrin及PERK-ATF4-CHOP信号通路的影响,从分子水平上阐述壮药复方仙草颗粒对高糖诱导下肾足细胞损伤的保护作用机制,以进一步揭示该方对于糖尿病肾病（Diabetic nephropathy,DN）的作用机制。方法:（1）将100只8周龄SD大鼠随机分为复方仙草颗粒高、中、低剂量给药组各20只和纯水对照组40只,每日1次,持续灌胃7天后,戊巴比妥钠麻醉大鼠,通过腹主动脉取血来制备含药鼠血清和空白大鼠血清;（2）将小鼠肾足细胞分为空白对照组（胎牛血清对照组）、阴性对照组（空白大鼠血清对照组）、模型对照组、二甲双胍对照组、厄贝沙坦对照组、不同浓度复方仙草颗粒含药血清给药组,分别干预体外培养24h、48h、72h。用CCK-8法测定复方仙草颗粒对肾足细胞细胞增殖活性影响;（3）流式细胞仪测定肾足细胞凋亡率;（4）透射电镜进行肾足细胞形态学观察;（5）western blot检测凋亡蛋白的表达;（6）RT-PCR检测目的基因m RNA的表达。结果:（1）CCK-8法测定复方仙草颗粒对肾足细胞增殖活性影响显示,模型组肾足细胞损伤明显,不同浓度复方仙草颗粒含药血清组对肾足细胞损伤具有保护作用（P＜0.05）,但剂量依赖性不明显（P＞0.05）;（2）流式细胞仪测肾足细胞凋亡率显示各组细胞凋亡率存在差异性,模型组凋亡率最大（P＜0.05）;空白对照组、阴性对照相近（P＞0.05）,证明空白大鼠血清对小鼠肾足细胞无毒性损伤作用;厄贝沙坦对照组凋亡率低于模型组及二甲双胍对照组（P＜0.05）,二甲双胍对照组与模型组相近（P＞0.05）,说明厄贝沙坦对高糖诱导的肾足细胞损伤保护作用优于二甲双胍,复方仙草颗粒低浓度给药组肾足细胞凋亡率与空白组、阴性组、二甲双胍对照组相近（各组间P＞0.05）,而中浓度、高浓度给药组凋亡率明显降低,均优于模型组（P＜0.05）,证明复方仙草颗粒对高糖诱导的肾足细胞损伤有保护作用且不依赖于降糖;不同浓度复方仙草颗粒含药血清给药组的凋亡率随浓度改变而有差异,凋亡率随低、中、高浓度升高而降低（P＜0.05）,存在剂量依赖的趋势。（3）电镜观察肾足细胞形态见各组细胞存在一定程度差异性。模型对照组细胞损伤相对最严重,各给药组细胞结构较模型组明显恢复。空白对照组、阴性对照组细胞整体结构尚可,再次证明空白大鼠血清不会对小鼠肾足细胞造成损伤;（4）凋亡蛋白在各组表达水平存在差异性,模型组表达最高,余给药组表达降低（P＜0.05）;（5）nephrin基因m RNA在模型组表达降低,其余给药组表达升高（P＜0.05）,PERK-ATF4-CHOP信号通路相关基因m RNA在模型组表达升高,余给药组表达降低（P＜0.05）。结论:（1）壮药复方仙草颗粒能促进高糖诱导损伤的肾足细胞增殖、抑制其凋亡;（2）壮药复方仙草颗粒能改善肾足细胞内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）,表现为降低因高糖诱导的ERS升高的凋亡蛋白水平及PERK-ATF4-CHOP通路相关基因、凋亡基因的表达水平,升高nephrin基因m RNA表达水平,其治疗DN的作用机制可能与通过调控高糖诱导的ERS中的PERK-ATF4-CHOP凋亡信号通路有关。
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