基于功能纳米材料的卡那霉素体外抗菌作用及治疗药物浓度监测方法研究

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目的(1)制备新型、高效的海藻酸钠-羧甲基壳聚糖/银纳米粒/卡那霉素抗菌水凝胶(Alginate Dialdehyde-Carboxymethyl Chitosan/Silver Nanopa-rticles/Kanamycin antimicrobial hydrogels,DCSK),增强其抗菌活性。(2)开发基于L-天冬氨酸(L-aspartic Acid,L-asp)功能化的金纳米粒(Asp Functionalized Gold Nanoparticles,Asp-AuNPs)探针的比率型比色方法简单、快速、灵敏检测尿液中的卡那霉素(Kanamycin,Kana)。方法(1)首先利用高碘酸钠(Sodium Periodate,Na IO4)将海藻酸钠(Sodium Alginate,SA)氧化成双醛海藻酸钠(Alginate Dialdehyde,ADA),ADA作为环境友好型还原剂和稳定剂还原硝酸银(Silver Nitrate,Ag NO3)得到ADA功能能化的银纳米粒(ADA Functionalized Silver Nanoparticles,ADA-AgNPs),并通过UV-vis、SEM、TEM、Zeta电位、XRD和XPS等手段对ADA-AgNPs进行表征;所得ADA-AgNPs进一步与ADA、羧甲基壳聚糖(Carboxymethyl Chitosan,CMCS)和Kana发生席夫碱交联反应制备DCSK。然后分析了DCSK的凝胶时间、微观形貌、溶胀性能、失重率和体外药物释放性能,并评价了DCSK的血液相容性和细胞相容性。最后通过摇瓶法和抑菌圈法研究了DCSK对大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的体外抗菌活性。(2)以四氯金酸三水合物(HAu Cl4·3H2O)为金源前驱体、硼氢化钠(Sodium Borohydride,Na BH4)为还原剂、L-asp为稳定剂一步法制备Asp-AuNPs复合物,并优化了p H、L-asp和Na BH4浓度等制备条件,考察了Asp-AuNPs的p H和温度稳定性。采用最优的Asp-AuNPs建立Kana的比色分析方法,通过Zetasizer nano-ZS研究Kana诱导Asp-AuNPs聚集所发生的平均粒径和电荷变化,考察了尿液中共存物质的干扰并采用标准加入法对尿液中的Kana进行了回收率分析。结果(1)UV-vis、SEM、TEM、Zeta电位、XRD和XPS的表征结果表明,所制备的ADA-AgNPs为单质银,其稳定性好、粒径分布窄。研究了不同制备条件下的DCSK的凝胶时间、溶胀性能、降解性能等的差别,综合各项性能,CMCS-2和ADA-2参数下的DCSK凝胶时间适宜(239 s)、溶胀性能良好(平衡溶胀率为3800%)、降解性能适宜(48 h内降解37%)和内部结构均匀(孔隙直径约200μm);DCSK在72 h内Kana累积释药率达到27%以上、溶血率小于4%、细胞存活率高于90%;细菌生长曲线和抑菌圈实验结果显示DCSK对E.coli和S.aureus表现出增强的体外抗菌活性。(2)所制备的Asp-AuNPs具有良好的分散性和稳定性;在50~500 n M范围内,吸光度比值(A690/A525)与Kana浓度之间呈良好的线性相关(r=0.998),最低检出限为28.3 n M(16.5 ng/ml)。尿液中共存物质对Kana检测不产生干扰,回收率范围为92.8%~108.2%。结论(1)DCSK生物相容性良好,对E.coli和S.aureus表现出增强的抗菌活性,是一种潜在的、有前景的治疗细菌感染的抗菌剂。(2)基于Asp-AuNPs探针的比色法可以准确检测尿液中的Kana,为临床尿液中Kana的浓度监测提供了一种新的分析手段。
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