脑卒中是一种突发性的脑血管疾病,具有极高的死亡率和致残率。目前缺血性脑卒中患者占卒中患者总数的80%以上。缺血性脑卒中发生后,位于梗死核心区的细胞在短时间内发生死亡,毗邻梗死核心区的区域被称为半暗带区。由于处于缺血缺氧环境中,位于半暗带区域的细胞不再具有电生理活性,但仍保持代谢活性,因此提升半暗带区细胞存活率对神经功能的恢复及预后有着至关重要的意义。小胶质细胞第一时间响应脑缺血损伤,发挥免疫作用。激活的小胶质细胞会极化为发挥促炎作用的Ml型和抗炎的M2型。小胶质细胞在半暗带区域首先极化为M2型,通过吞噬损伤神经元,清理细胞碎片,释放修复因子来发挥保护作用。随着缺血缺氧的时间延长,梗死核心区向半暗带区域扩散,小胶质细胞转变为促炎的M1型,释放促炎介质产生炎症级联反应,吞噬正常神经元造成神经元丢失。调节小胶质细胞的不同极化状态被认为是一种有效的脑缺血治疗策略,因此解析小胶质细胞在脑缺血后的调控机制,将有助于以小胶质细胞为导向的神经保护剂的开发。早期的理论认为,脑缺血后神经元是小胶质细胞的靶向细胞,随着研究发现,神经元可能对小胶质细胞具有调控作用。Biker等在2007年提出了神经元通过“on”,“off”信号来调控小胶质细胞。在后续的研究中发现,脑缺血后神将元通过释趋化因子、谷氨酸、ATP等调节小胶质细胞的激活和极化。而目前研究发现神经元可以分泌多种趋化因子,趋化因子不仅分子量小,且多种趋化因子受体表达于小胶质细胞中。因此,趋化因子是一种理想的神经元-小胶质细胞交互作用的信使。趋化素样因子-1（chemokine like factor-1,CKLF1）是我国科学家首次报道的一种趋化因子。本课题组的前期研究中发现,CKLF1在健康脑组织无表达,仅在脑缺血后发生高表达。抑制或敲除CKLF1后,能够有效改善脑缺血引起的神经行为学损伤,减小梗死面积,降低脑水肿。在前期研究中发现,我们发现CKLF1仅与神经元具有共定位,且外源性给予CKLF1的活性肽段C27能够促进小胶质细胞M1型极化,但缺血后CKLF1的表达调控及其对小胶质细胞表型变化的分子机制均尚未阐明,严重阻碍了其作为新型抗脑卒中治疗靶点的研究。为观察缺血对CKLF1表达调控的影响,我们分别对各类原代细胞进行糖氧剥夺再灌注（Oxygen and glucose deprivation/reperfusin,OGD/R）造模后检测发现仅有神经元中CKLF1 mRNA及蛋白表达显著增加。体内研究发现,大鼠缺血侧皮层内发现神经元和CKLF1具有共定位。在确定神经元是脑卒中后CKLF1的主要来源细胞后,我们对CKLF1在神经元的转录调控进行了探索。我们通过数据库预测了 CKLF1的转录因子,基于预测结果,我们对原代神经元细胞进行OGD造模后给予NF-κB抑制剂,实验结果发现抑制NF-κB活性后能显著降低CKLF1 mRNA及蛋白的表达。为进一步研究NF-κB是否直接调控CKLF1的转录,我们通过染色质共沉淀实验发现NF-κB与CKLF1启动子有直接结合,且在脑卒中后结合增加。通过双荧光素酶报告基因实验发现,NF-κB能够直接促进CKLF1的转录,其结合位点为-249至-238bp的碱基对。在如上实验的基础上,我们分别用体内和体外实验探究了 CKLF1是否介导了神经元-小胶质细胞间的交互作用。体外实验中,我们采用神经元上清转移实验,结果发现阻断CKLF1活性或是抑制NF-κB的活性均可显著降低条件培养基对小胶质细胞极化状态的影响。在体内实验我们成功制备了缺血脑区神经元CKLF1敲除大鼠。对大鼠进行MCAO造模,发现特异性敲除神经元中的CKLF1后,小胶质细胞向M1型极化显著降低,而向M2型极化显著增加。确定CKLF1介导神经元-小胶质细胞间的交互作用后,我们对CKLF1促进小胶质细胞向M1型极化的机制做了初步的探索。发现CKLF1能够促进小胶质细胞p38和JNK磷酸化,对ERK无影响。本实验通过对BV2小胶质细胞外源性给予CKLF1活性肽段C27后,发现TREM-2在C27的作用下表达降低,并与C27呈现出剂量依赖,且特异性敲除神经元CKLF1能够促进小胶质细胞中TREM-2的表达。进一步研究发现C27可能是通过自噬溶酶体途径降解TREM-2蛋白。本研究报道了一种介导脑卒中后神经元-小胶质细胞交互作用的分子—CKLF1,为神经元在脑卒中后的细胞功能做了进一步的解释。本课题组已经报道抑制CKLF1能有效改善脑卒中,而在本实验中进一步研究了 CKLF1加重脑卒中损伤的机制,从而为以CKLF1为靶点的药物开发提供了相关依据。本文通过相关技术手段确定了 CKLF1的细胞来源,并在此基础上解析了 CKLF1的转录调,这将有利于未来关于CKLF1的基础研究。