β-葡萄糖苷酶是纤维素酶中重要的组成成分，能够将纤维二糖水解成葡萄糖。而纤维二糖的积累会对内切β-葡聚糖苷酶和外切β-葡聚糖苷酶产生明显的抑制作用，β-葡萄糖苷酶能够缓解这种抑制作用，所以β-葡萄糖苷酶是纤维素降解过程中的关键酶、限速酶。但是β-葡萄糖苷酶的水解产物葡萄糖，又会对β-葡萄糖苷酶产生明显的产物抑制作用。所以发现一种能够耐受葡萄糖抑制的β-葡萄糖苷酶是以后的研究方向。　　黑曲霉在酶制剂方面有着重要的应用，有着高效的蛋白分泌系统。黑曲霉也是β-葡萄糖苷酶的高产菌株，能够产生大量的胞外β-葡萄糖苷酶，随着工业酶生产菌株CBS513.88和柠檬酸生产菌株ATCC1015测序工作的完成，我们将预测的β-葡萄糖苷酶基因挑选出来，通过对信号肽的预测，发现黑曲霉含有大量的胞内β-葡萄糖苷酶基因，根据葡萄糖的运输机制，推测胞内β-葡萄糖苷酶的耐受葡萄糖的能力可能要优于胞外基因。为了验证我们的想法，研究了黑曲霉部分胞内β-葡萄糖苷酶的性质，结果如下：　　⑴根据公布的黑曲霉基因组数据显示，预测含有15型β-葡萄糖苷酶，其中3型属于GH1家族，12型属于GH3家族。依据信号肽的有无，预测含有6型胞内β-葡萄糖苷酶，GH1含有1型，GH3含有5型。　　⑵以麸皮、麦秸杆、甘蔗渣（SEB）、纤维二糖、木糖、蔗糖为底物时，胞内β-葡萄糖苷酶的活性存在较大差异，其中能够诱导出较高活性的底物有麸皮、麦秸杆、甘蔗渣（SEB），而且酶活性随着诱导时间的延长而增加。以木糖和蔗糖为底物时，胞内β-葡萄糖苷酶的活性很弱。以纤维二糖为底物时，酶活性不如自然底物时诱导的明显，但明显比木糖的诱导能力突出。　　⑶对于用以上六种碳源进行诱导时，GH1的表达量始终是最高的，GH3-12的表达量最低。GH1和GH3-12的表达模式非常相近，都能够快速的响应麦秸杆，且以纤维二糖为底物时，表达水平随着时间的延长表达量降低。其余四种β-葡萄糖苷酶的表达很相近。　　⑷在扩增GH1家族的基因时，出现了两种不同的转化子，其中一个比正常基因缺失72bp，而且不是随机出现的情况，比例约占1/3，通过同源比对，这72bp结构为蛋白外层的两个α-螺旋之间的连接结构，功能未知。将胞内bgl在原核中表达，可以得到大量表达，但大部分是以包涵体的形式存在，通过把诱导物IPTG和降低温度相结合的方法，上清中获得了少量可溶性蛋白，即使有可溶性蛋白，也是没有活性的蛋白　　⑸在毕赤酵母中进行分泌表达，在上清中不能发现目的条带，但是可以测量到相应的酶活，通过粗酶对pNPG的活性来研究胞内BG的酶学性质，发现最适pH在6.6附近，偏中性，最适温度在50℃，在55℃时基本没有活性。通过HPLC对产物的分析发现，对纤维二糖水解活性最明显的是GH1-4。GH1-4和GH1-7相比，对纤维二糖的水解活性下降非常明显。粗酶液对纤维二糖反应时没有表现出转糖苷的活性。　　⑹在毕赤酵母胞内表达黑曲霉胞内BG，玻璃微珠破碎，经过Ni+初步纯化之后，能够看到微弱的条带，与分泌表达相比，酶活大幅度提高。以pNPG为底物时GH1-4，GH1-7，GH3-12纯酶的最适pH在6.6-7.0，pH在4.6时基本丧失活性，最适温度都在50℃。胞内BG对pH不敏感，在最适pH的半衰期将近300min，但是胞内BG对温度比较敏感，而且GH1-7对温度非常敏感，半衰期只有60min，其余半衰期210min。以pNPG为底物时，GH1-4，GH1-7，GH3-12的Km分别为0.277、0.434、0.361mM，对pNPG的亲和性GH1-4要高于GH1-7和GH3-12，葡萄糖对GH1-4，GH1-7，GH3-12的抑制常数分别为165、138、170mM，对葡萄糖具有明显的耐受作用。