【摘 要】
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背景与目的:原发性肝癌早期临床症状常不明显,一旦出现症状,一般为进展期肝癌,已失去最佳治疗时机,故肝癌的早期诊断非常重要。目前临床上诊断肝癌基本依靠血清标志物AFP及影像学检查,但小肝癌不理想。适配子是人工合成的单链寡核苷酸,功能与抗体类似,但比抗体具有更多的优势,具有与靶目标物质进行高亲和力、高特异性的结合的特点,用于疾病特别是肿瘤的诊断有良好的应用前景。本课题组在前期研究中通过SELEX技术成
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背景与目的:原发性肝癌早期临床症状常不明显,一旦出现症状,一般为进展期肝癌,已失去最佳治疗时机,故肝癌的早期诊断非常重要。目前临床上诊断肝癌基本依靠血清标志物AFP及影像学检查,但小肝癌不理想。适配子是人工合成的单链寡核苷酸,功能与抗体类似,但比抗体具有更多的优势,具有与靶目标物质进行高亲和力、高特异性的结合的特点,用于疾病特别是肿瘤的诊断有良好的应用前景。本课题组在前期研究中通过SELEX技术成功筛选出一批肝癌血清适配子,建立了基于三重荧光分析的肝癌适配子诊断应用技术,并发现适配子在不同实验条件下对肝癌的诊断效率有所不同。本研究将在前期工作基础上进一步研究适配子联合分析在肝癌诊断中的价值,为建立基于适配子的肝癌诊断技术奠定基础。方法:1.血清标本及其相关临床资料收集:收集就诊于南昌大学第一附属医院2014-2015年的原发性肝癌和肝硬化患者的血清标本各104例,-80°C保存备用,同时收集相关的临床资料,主要包括年龄、性别、血清肿瘤标志物、肝功能、凝血功能、影像学检查、病理资料等。2.适配子与血清标本作用前后的荧光值测定:人工合成肝癌血清适配子AP-HCS-11-6、AP-HCS-9-89。使用real-time PCR仪测定三重血清荧光值,即血清自体荧光值、加入Eva Green染料后的荧光值和加入适配子后的荧光值。以血清3μL、2×Eva Green核酸染料2.5或5μL、适配子0.3、0.5或0.7 pmol为基本元素组合6种不同的实验条件,分别在8℃、18℃、28℃、37℃、47℃、55℃检测肝癌、肝硬化血清标本的荧光值。3.荧光值对肝癌的诊断价值评价:以荧光检测结果为测试变量进行ROC曲线分析,以AUROC评价诊断价值大小,并根据ROC曲线分析结果确定最佳界值,计算荧光值对肝癌的诊断效率,包括敏感度、特异度、准确度、阴性预测值和阳性预测值、阴性似然比和阳性似然比。单个荧光指标直接进行ROC曲线分析评价其诊断价值。多个荧光指标联合通过二元Logistic回归建模并获取模型对标本的类别概率预测值,再以后者为测试变量进行ROC曲线分析,评价其诊断价值。4.联合分析对肝癌的诊断价值评价:按上述诊断价值评价方法,评价单个适配子不同条件或温度下荧光检测结果联合分析对肝癌的诊断价值（包括各温度下单条件、各温度下双条件、各温度下三条件、各条件下双温度、各条件下三温度的检测结果联合分析）、两个适配子的荧光检测结果联合分析对肝癌的诊断价值（包括各温度下单条件、各温度下双条件、各条件下双温度的检测结果联合分析）、适配子与AFP联合分析对肝癌的诊断价值。结果:1.单个适配子联合分析对肝癌的诊断价值:适配子AP-HCS-11-6和AP-HCS-9-89在不同温度或实验条件下的荧光检测结果对肝癌的诊断价值存在差异,单个荧光指标诊断肝癌的最大AUROC为0.721,联合分析明显优于单个指标,各温度下双条件、各温度下三条件、各条件下双温度、各条件下三温度的检测结果联合分析诊断肝癌的最大AUROC均在0.9以上。2.两个适配子联合分析对肝癌的诊断价值:两个适配子的荧光检测结果联合分析对肝癌的诊断价值明显优于单个适配子,各温度下双条件、各条件下双温度的检测结果联合分析,其诊断肝癌的最大AUROC均在0.9以上。3.适配子与AFP联合分析对肝癌的诊断价值:相同条件下双温度检测结果联合AFP诊断肝癌的AUROC、特异度、敏感度、准确度均可达到0.9以上,较其他联合方式对肝癌的诊断效果更好。结论:1、肝癌血清适配子在不同温度和实验条件下的检测结果对肝癌的诊断价值有差别。2、单个适配子在不同条件或不同温度下的检测结果联合分析能有效提高诊断肝癌的价值。3、两个适配子联合分析较单个适配子诊断对肝癌具有更好的诊断价值。4、适配子与AFP联合分析能进一步提高对肝癌的诊断价值。
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