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新城疫作为禽类常发的急性烈性传染病,一直是禽病防控的重点,对病原实时、快速、敏感地检测具有重要意义。禽腺病毒近年来在山东省常有发生,给养禽业造成重大损失,其隐形感染的特点为疾病的防控带来困难。本研究从山东省分离新城疫病毒和禽腺病毒,并进行生物学特性和遗传变异分析,为疾病的防治提供依据,主要研究包括以下两部分: 试验一新城疫病毒便携式real-time RT-PCR现场快速检测及遗传变异特性分析 在养殖现场条件下对疑似新城疫病例提取病毒核酸,采用便携式real-time RT-PCR仪T-COR4快速检测新城疫病毒;然后对检测的阳性样品进行实验室生物学特性分析。结果显示:发病地区新城疫的发生呈非典型症状、多种基因型并存、具有免疫带毒现象等特点。从发病鸡只病料中分离到5株新城疫病毒,分别编号为RS1、RS2、HY3、LZ4、PL5。经病毒增殖、生物学指标测定、F基因的扩增及克隆测序结果综合显示,RS1、RS2、HY3三株显示为基因Ⅶ型新城疫强毒株,与常规疫苗株间的同源性较低,系统进化树中与当前山东、江苏等地流行的Ⅶd型新城疫分离株亲缘关系近,属同一分支。LZ4、HY5属于基因Ⅱ型新城疫弱毒株,与标准疫苗株LaSota的亲缘关系较近,核苷酸同源性均为99%以上。 试验二Ⅰ群禽腺病毒的分离鉴定及遗传变异分析 在4家养鸡场共分离到9株Ⅰ群禽腺病毒,该病多发于2~6周龄肉鸡,呈急性发病后突然死亡,发病季节集中在9~12月份,呈局部地方性流行。分离株不具备凝集鸡、鸭、大鼠红细胞的特性。卵黄囊接种鸡胚增殖,胚体表现体型小,肝脏肿大现象。对病毒的hexon基因进行扩增和克隆测序分析,结果显示LY9株与I群禽腺病毒血清8型的亲缘性近,核苷酸同源性达98.8%;其余8株与Ⅰ群禽腺病毒血清4型参考株在进化树中属同一分支,分离株间及与参考株间的同源性较高,为91.3~100.0%。