研究背景胃癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在所有恶性肿瘤中位列第四位。在我国胃癌的男、女性发病率分别居各种恶性肿瘤发病率的第2和第3位。因其起病隐匿,早期症状不明显,所以多数患者就诊时,肿瘤已处于中晚期,部分患者已有腹腔转移,即使采取积极治疗的方法,但疗效仍不理想。胃癌组织通常首先在粘膜内蔓延、扩散,突破粘膜层后向外依次侵犯粘膜下层、肌层、浆膜下层、浆膜层,突破浆膜层后进而侵犯大、小网膜、腹膜、肝脏、胰腺、横结肠等邻近组织器官。当胃癌组织穿透浆膜层后,肿瘤细胞可发生脱落并种植于腹膜,大、小网膜或其他脏器表面,形成种植性转移结节。传统治疗方法对于胃癌腹腔种植转移疗效欠佳。胃癌腹腔转移出现在胃癌晚期,预后极差。腹腔热灌注化疗(hyperthermic intraperitoneal chemotherapy, HIPEC)作为近年来新出现的一种治疗晚期腹腔恶性肿瘤的手段,引起了国内外学者的广泛关注。其通过高温对肿瘤细胞的直接杀灭作用,高温与化疗的协同作用以及大流量灌注冲刷、过滤作用有效地杀灭和清除腹腔内残留的癌细胞和微小转移灶(≤5mm),从而起到能够预防和治疗腹膜转移癌的作用。该治疗方法具有较高的有效性及安全性,现已被广泛应用于治疗进展期胃癌、结直肠癌、卵巢癌、腹膜假性粘液瘤等腹腔恶性肿瘤。特别是在晚期胃癌合并腹腔广泛转移的患者身上取得了令人可喜的疗效。热休克蛋白(Heat Shock Protein, HSPs)是一类高度保守的蛋白,具有很强的细胞内功能并被认为在各种应激反应中发挥着保护因子的作用。HSP70是一类大分子量的ATP依赖的分子伴侣。广泛参与细胞内蛋白质的合成、转移、装配等环节,促进细胞增殖。同时,热应激后各组织细胞受不同热作用均有新的蛋白质合成,其中以70kDa家族的热休克蛋白(HSP70)合成最多。因此,HSP70被认为是最出色的的热耐受预测因子。热休克蛋白90(heat shock protein90, HSP90)是另一种大分子量的热休克蛋白,具有维持蛋白稳定、促进细胞生长等功能,在细胞生长、发育、分化等过程中发挥重要作用。本课题旨在通过检测胃癌细胞SGC-7901在经过热处理后HSP70和HSP90的表达变化情况并结合胃癌患者在接受热灌注治疗后血清中HSP70和HSP90的浓度变化情况,探讨胃癌细胞在热处理后的热耐受情况,从而进一步为确定胃癌患者腹腔热灌注化疗治疗间隔提供理论参考依据。研究目的研究胃癌细胞在接受热处理后HSP70和HSP90的表达变化；研究胃癌患者在接受腹腔热灌注化疗后血清中HSP70和HSP90的表达规律；探讨胃癌患者接受腹腔热灌注化疗治疗的时间间隔以及腹腔热灌注化疗对胃癌细胞侵袭、转移的影响。研究方法细胞学实验：选用SGC-7901胃癌细胞株进行实验,该细胞株为低分化胃腺癌细胞,为临床常见的胃癌组织学类型,具有较强的代表性。成功培养细胞后,用二氧化碳培养箱41℃对细胞进行热处理后继续培养,按照实验设计时间点取细胞样本利用rt-PCR以及western-blot对HSP70和HSP90的表达情况进行检测。并且制作SGC-7901细胞爬片并同样进行热处理后按照不同时间点利用免疫组织化学法观察HSP70和HSP90表达情况。病例的筛选及临床、病理资料的收集：连续选择于2013年1月至2013年10月期间,在广州医科大学附属肿瘤医院行腹腔热灌注化疗治疗的胃癌患者的规定时间点血清样本。入选胃癌患者均为接受单纯腹腔热灌注化疗治疗,未接受其他治疗。采用SPSS16.0软件进行统计分析。P<0.05为显着性检验的标准。实验结果1、热处理前后胃癌细胞SGC-7901中HSP70和HSP90的表达情况：HSP70在接受热刺激后的8小时内持续保持高表达(P<0.05),但在12小时后开始出现下降(P<0.05)。HSP70的高峰出现在热处理后的4小时处。HSP90在热处理后的0小时、12小时、32小时和48小时均出现了表达的高峰(P<0.05),在16小时处出现一个明显的表达降低(P<0.05),其余时间点较处理前未见明显差别(P<0.05)。2、免疫组化显示HSP70与HSP90在胃癌细胞中的表达主要定位于细胞浆中。通过对热处理后的不同时间点的胃癌细胞SGC-7901进行免疫组化染色显示,HSP70的与mRNA的表达一致。HSP90除了16小时与44小时外,其余时间点的表达量均较未处理细胞高。3、胃癌患者血清中HSP70与HSP90的表达在热灌注化疗治疗后均有所升高,但均在24小时后恢复正常。研究结论1、胃癌细胞在接受恒温热处理后HSP70与HSP90均有不同程度的升高。HSP70在12小时后开始下降,而HSP90则持续呈现波动性表达。2、胃癌患者在接受HIPEC治疗后,血清中HSP70与HSP90表达均有所升高。3、在接受恒温热处理之后的24小时内细胞及血清中热休克蛋白呈现高表达,这一时间内的再次治疗疗效会有显着降低。因此两次热灌注化疗治疗至少应保持有24小时的时间间隔。