嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌复合发酵合成共轭亚油酸的研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:zqfr3
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共轭亚油酸(CLA)是含有共轭双键的一系列十八碳二烯酸位置和几何异构体的总称,是具有多种生理活性的天然脂肪酸,如抗癌、抗粥样动脉硬化、减肥、抗氧化、预防糖尿病、免疫调节等生理活性。目前,CLA工业化生产主要由化学异构法制得,但其产物异构体组成较为复杂。而利用微生物合成CLA,异构体组成单一、反应条件温和,并且主要产物是具有生理功能的c9,t11-CLA;和t10,c12-CLA异构体,因此生物合成CLA已受到越来越多的重视。本文从淘米水中筛选出一株高产CLA的菌株,通过菌株的形态特征及生理生化实验,确定其为植物乳杆菌Y8(Lactobacillus plantarum)。以该植物乳杆菌和实验室保藏的嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)为出发菌株,优化其混菌复合发酵的培养条件。采用紫外分光光度法对CLA进行定量分析。通过紫外诱变、硫酸二乙酯诱变选育出两株将LA转化为CLA能力较高的菌株,采用响应曲面法优化混菌复合发酵条件,进一步提高CLA产量。植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌原始菌株在不同培养基中混菌复合发酵产CLA的最佳条件为:在脱脂乳培养基(SKM)中,培养温度34℃,培养时间72h,接种量5.0%,培养基初始pH5.5,底物添加量4%,菌种比例4:1(Y8:La)时CLA合成量达到160.35μg/mL;在MRS培养基中,培养温度34℃,培养时间48h,接种量3.0%,培养基初始pH6.5,底物添加量3.5%,菌种比例4:1(Y8:La)时CLA合成量为μg/mL;将植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌进行紫外诱变和硫酸二乙酯诱变,选取高CLA产量的突变株Y8-1和La-1,其中Y8-1的CLA产量为83.52μg/mL,较原始菌株提高了45.61%;La-1的CLA产量为65.37μg/mL,较原始菌株提高了83.16%。响应曲面法优化Y8-1和La-1混菌复合发酵,产CLA的发酵条件为:培养温度36.5。C,底物添加量5.0%,pH6.5,接种量为5.0%,菌种比例(Y8-1:La-1)4:1,培养时间48h,CLA的最高产量为319.26μg/mL,比原始菌株的CLA产量提高了99.1%。
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