类风湿关节炎（RheumatoidArthritis, RA）是一种严重的系统性疾病，如不及时治疗，一般2年内就可以造成关节强直畸形，最后导致残疾。炎症因子肿瘤坏死因子（TNF）在该病的发生和发展的过程中作用关键。Remicade （Infliximab）作为第一个FDA批准上市的靶向人TNF人鼠嵌合单克隆抗体药物，在类风湿关节炎（RA）、克罗恩病、溃疡性结肠炎、强直性脊柱炎（AS）、银屑病关节炎、斑块性银屑病的治疗上效果显著。但是Remicade的使用常伴有超敏反应发生，同时伴随着抗抗体的增加，从而严重影响Infliximab的疗效和应用。其主要原因是Remicade由SP2/0表达系统表达，含有较多复杂型的双分支型糖和杂合型糖，有些糖形可以引发药物超敏反应和免疫原性。本研究中，我们采用不同于Remicade的表达系统——中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达系统，通过不同培养工艺成功制备出改良糖形结构和C-端赖氨酸截除率较高的新型重组抗TNFα人鼠嵌合基因工程抗体（以下简称CMAB008）。由于该抗体的复杂糖形和致免疫原性的糖形较少，因此输液反应及抗抗体（ADA）的发生率显著降低。具有较Remicade单抗更好的临床安全性。本课题采用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱（LC-ESI-Q-Tof）技术，从不同水平对CMAB008及Remicade进行了表征分析，鉴定两抗体表征结构的异同；ELISA确定二者亲和常数，并通过临床前药效学研究分析了两抗体在体内外中和TNFα的作用。最后通过CMAB008的I期临床研究，了解CMAB008的药代动力学，药物的耐受性及免疫原性的特征。表征分析部分，使用了SDS-PAGE对抗体的表观分子量进行了初步研究，然后通过LC/MS技术分析了抗体完整蛋白精确分子量、轻重链的精确分子量、一级结构、主要翻译后修饰和糖基化特征。结果表明CMAB008及Remicade具有相同的一级结构，但两者C-端赖氨酸截除率CMAB008较高，Remicade含有更多的复杂糖基化修饰。药效试验体外部分利用TNFα敏感的小鼠成纤维细胞系L929进行测活，研究两抗体中和TNFα以保护L929细胞的作用，结果表明，Remicade和CMAB008中和TNFα的ED50分别为：11.69和11.63ng/ml，活性相当；体内试验通过建立小鼠TNFα毒性模型，研究两抗体在小鼠体内中和TNFα的作用，结果表明，相同rhTNFα剂量条件下，Remicade组和CMAB008组组间动物生存率无明显差异；利用ELISA法来检测两抗体对rhTNFα的亲和常数，测得CMAB008的亲和常数约为0.68×1010M-1与Remicade1×1010M-1亲和力基本一致，二者均可有效中和rhTNFα，且效果相似。I期临床试验采用ELISA法检测受试者CMAB008的血药浓度，通过临床观察记录药物的不良反应，使用“抗体桥法”检测CMAB008的免疫原性。结果表明，CMAB008的药代动力学特征与Remicade基本一致。临床耐受性良好，单次给药3mg/kg剂量组（临床推荐给药剂量）没有不良反应发生，多次给药试验期间均未出现任何严重不良事件，未发生注射部位反应（红肿、瘀斑或皮疹），单次给药共有2例受试者产生抗抗体，多次1例，经验证都为非中和性抗体。本研究证明，通过CHO表达系统培养并优化工艺获得的CMAB008单抗，不影响单抗药物活性和代谢特征，可有效降低单抗的免疫原性，避免超敏反应的发生，减少临床不良反应的发生率，有望成为安全性及耐受性更好的TNFα靶向新药。