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本文以海水肉食性鱼类大菱鲆（Scophthalmus maximus）为研究对象，探讨饲料中糖类对大菱鲆糖代谢酶活性和基因表达量的影响。主要研究结果如下：1.采用3×4双因素实验设计，以初始质量为（8.06±0.08）g的大菱鲆幼鱼为对象，研究在饲料中添加3种糖源（葡萄糖、蔗糖和糊精）及4个水平（0、5%、15%和28%）对大菱鲆肝脏糖酵解关键酶（己糖激酶（HK）、葡萄糖激酶（GK）、磷酸果糖激酶（PFK）、丙酮酸激酶（PK））和糖异生关键酶（磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）、1,6-二磷酸果糖酶（FBPase））活性的影响。结果表明：饲料糖添加量从0升高到15%时，大菱鲆的糖酵解酶GK和PK活性随饲料葡萄糖或糊精含量的增加而增加；当饲料中葡萄糖或糊精含量为28%时，GK和PK活性有下降的趋势。三种糖源的4个添加水平对HK和PFK活性均无显著影响（P>0.05）。添加不同水平的葡萄糖对大菱鲆糖异生途径的PEPCK活性无显著影响（P>0.05），但饲料中葡萄糖添加量为5%时显著促进了FBPase活性（P <0.05），当葡萄糖添加量升高为15%或28%时，FBPase活性与对照组无显著差异（P>0.05）。糊精作为饲料糖源时抑制了大菱鲆肝脏FBPase和PEPCK的活性，而添加不同水平的蔗糖对FBPase和PEPCK活性的影响均不显著（P>0.05）。总的来说，从大菱鲆幼鱼肝脏糖代谢角度而言，饲料添加15%的葡萄糖或糊精时，可以有效促进大菱鲆肝脏糖酵解能力；较添加葡萄糖，糊精在促进大菱鲆肝脏糖酵解的同时对糖异生存在一定程度的抑制。蔗糖作为饲料糖源时，仅在添加量为28%时显著促进糖酵解酶GK活性，糖酵解其他酶活性以及糖异生酶活性均不受蔗糖水平的显著影响。2.同时，我们利用RACE技术从大菱鲆肝脏中克隆得到了糖酵解关键酶葡萄糖激酶（GK）、糖异生关键酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（细胞质型和线粒体型，cPEPCK和mPEPCK）、果糖-1，6-二磷酸酶（FBPase）、葡萄糖-6-磷酸酶（两种不同亚型，G6Pase1和G6Pase2）的cDNA序列全长。分析发现：（1）大菱鲆GK序列全长2226bp，开放阅读框1434bp，编码478aa（序列登录号NO.JX678944）。其氨基酸序列与其他脊椎动物相比有较高的相似性，与金头鲷（Sparus aurata）同源性最高，为94%。其主要功能位点（ATP结合位点、葡萄糖结合位点、N-连接糖基化位点等）的氨基酸残基与其他脊椎动物的一致。大菱鲆GK在肝脏、肾、肠、心脏、鳃、肌肉、脑7个组织中均有表达，在肝脏中的表达量最高。（2）大菱鲆FBPase序列全长1314bp，开放阅读框共1014bp，编码337aa（序列登录号NO. KC184130）。其氨基酸序列与鲈鱼（Lateolabraxjaponicus）相似度最高，为96%。系统进化分析结果表明大菱鲆的FBPase序列可能为肝脏型，在肝脏中表达量最高，在肾中的表达量次之，鳃中最低。在大菱鲆中是否存在也肌肉型的FBPase，尚需要进一步研究证实。（3）从大菱鲆肝脏中克隆得到的G6Pase1和G6Pase2两个序列的同源性为52%：G6Pase1序列全长1641bp，开放阅读框1083bp，编码360aa（序列登录号NO. KC184131）；G6Pase2序列全长1357bp，开放阅读框1058bp，编码352a（a序列登录号NO. KC184132）。G6Pase两种亚型都主要在肝脏、肠、肾脏中表达，其中肝脏中G6Pase1的表达量约为G6Pase2基因表达量的2.6倍。根据系统进化结果并分析功能结构域发现，从大菱鲆肝脏中克隆得到的G6Pase1可能为G6Pase基本型，G6Pase2可能为其他亚型。（4）大菱鲆肝脏中存在两种构型的PEPCK，cPEPCK全长2833bp，开放阅读框从134-2008bp，编码624aa（序列登录号KC149517）；mPEPCK全长3124bp，开放阅读框从137-2044bp，编码635aa（序列登录号KC149516）。大菱鲆的cPEPCK与军曹鱼（Rachycentron canadum）的cPEPCK同源性最高，而mPEPCK与鲈鱼的mPEPCK同源性最高，在大菱鲆肝脏中的mPEPCK约占70%，而cPEPCK约为30%。大菱鲆的cPEPCK和mPEPCK氨基酸序列都同样具有和底物草酰乙酸结合的结构域、与GTP结合的激酶-1基序以及与Mg2+结合的激酶-2基序，由cPEPCK和mPEPCK氨基酸序列所反映的系统发育关系与传统分类基本一致。本研究结果表明，在大菱鲆中存在的上述糖代谢酶基因在进化过程中均是保守的，这一结果为研究大菱鲆糖代谢基因的表达调控机理提供了基础资料。3.在以上研究的基础之上，利用实时荧光相对定量法分析饲料糖源（葡萄糖、蔗糖和糊精）和糖水平（0、15%、28%）对大菱鲆肝脏糖代谢酶基因表达量的影响，研究结果表明：（1）饲料中糖显著促进了大菱鲆肝脏葡萄糖激酶（GK）的基因表达量，在葡萄糖添加量为15%时GK表达量与添加量为28%时无显著差异，但添加15%蔗糖或糊精时GK基因表达量都显著高于添加28%蔗糖或糊精时。（2）大菱鲆肝脏中线粒体型磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（mPEPCK）基因的表达量不受饲料糖源和添加水平的影响（P>0.05）；细胞质型磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（cPEPCK）基因的表达量不受饲料中添加葡萄糖和蔗糖的影响（P>0.05），饲料添加糊精显著抑制了cPEPCK的表达（P <0.05）。（3）1,6-二磷酸果糖酶（FBPase）基因的表达量不受饲料中添加葡萄糖和蔗糖的影响（P>0.05）；饲料添加糊精显著抑制了FBPase基因的表达（P <0.05）。（4）大菱鲆肝脏中存在两种亚型的葡萄糖-6-磷酸酶（G6Pase），其中饲料中糖类对G6Pase1的相对表达量均无显著影响（P>0.05）；饲料中添加糊精对G6Pase2表达量无显著影响（P>0.05），但28%葡萄糖组的G6Pase2表达量显著低于添加15%时（P <0.05），15%蔗糖组的G6Pase2表达量显著高于对照组（P <0.05）。实验结果表明，在大菱鲆中饲料添加葡萄糖对GK基因表达的促进作用都显著高于添加糊精，大菱鲆GK活性和基因表达都受到饲料糖类的一致调控；在本实验条件下，糊精对大菱鲆肝脏糖异生酶（FBPase、cPEPCK）的基因表达存在一定程度的抑制，但对G6Pase的两种亚型都无影响；添加葡萄糖或蔗糖都对上述酶的基因表达无影响；大菱鲆肝脏mPEPCK的表达不受饲料糖的影响，为组成型表达。