人羊膜间充质干细胞和人羊膜上皮细胞移植治疗帕金森病模型大鼠的效应比较

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目的:人羊膜来源的羊膜间充质干细胞(hAD-MSCs)和羊膜上皮细胞(hAECs)都具有多向分化能力,有望成为治疗PD新的细胞供源。本实验探讨hAD-MSCs、 hAECs原位移植治疗PD模型大鼠的疗效,比较不同途径移植hAD-MSCs治疗PD模型大鼠的疗效,并观察移植细胞在病损区的存活与分化。方法:①采用二酶消化法分离培养hAD-MSCs、hAECs细胞,用流式细胞术(FCM)和免疫细胞化学(ICC)染色进行鉴定。②内侧前脑束(MFB)单点注射6-OHDA复制单侧PD大鼠模型。模型动物24只随机分为四组:对照组(n=6)原位注射等量无血清L-DMEM培养基8μl;原位移植hAD-MSCs组(n=6,3×105cells/8μl);原位移植1AECs组(n=6,3×105cells/8μl);舌下静脉移植hAD-MSCs组(n=6,5×106cells/ml)。细胞移植后每周腹腔注射阿朴吗啡0.5mg/kg诱导大鼠旋转,持续观察10周,监测PD大鼠行为学变化。③免疫荧光技术检测细胞移植后2周和12周两个时间点PD大鼠脑损毁区供体细胞存活及分化,同时采用免疫组化检测各组TH的分布。结果:①分离培养所得hAD-MSCs、hAECs均具有各自典型的生物学特性:第三代hAD-MSCs不表达CD34、HLA-DR、CD19、CD14、CD45、CD80和CD86,表达CD73、CD44、CD105和CD90。第三代hAECs不表达CD34、CD45、CD71、CD80和CD86表达CD44、CD29和CD73;②原位移植hAD-MSCs组第2至8周,与对照组比较,行为学有明显改善,旋转次数分别为13.1±2.7r/min、11.0±1.4r/min、9.3±1.3r/min、7.6±1.0r/min、10.3±1.5r/mim、8.3±3.6r/min和8.9±3.7r/min(均P<0.05);原位移植hAECs组第2至10周,旋转次数分别为10.9±2.6r/min、6±2.2r/min、9.2±2.6r/min、9.2±2.4r/min、8.5±2.6r/min、8.2±1.9r/min、7.2±2.9r/min、8.2±1.9r/min和8.7±3.0r/min,与对照组比较行为学有明显改善(均P<0.05);舌下静脉移植hAD-MSCs组第2至6周,旋转次数分别为分别为7.4±2.0r/min、8.2±4.6r/min、8.5±7.3r/min、9.3±4.4r/min和8.0±5.8r/min,较对照组有明显改善(均P<0.05)。原位移植hAECs组行为学改善持续时间较hAD-MSCs原位移植组长2周,原位移植hAD-MSCs组较舌下静脉移植组行为学改善持续时间长2周;③免疫荧光染色结果显示,原位移植hAD-MSCs组和1(?)AECs组移植后2周和12周,病损脑组织中均有植入的细胞存活并表达人神经元细胞微管结合蛋白MAP2,但hAD-MSCs舌下静脉移植组未检测到供体细胞。免疫组化染色显示各移植组病损脑区TH表达均强于较对照组;hAD-MSCs和hAECs原位移植组TH表达较hAD-MSCs舌下静脉移植组强。结论:本研究复证了hAD-MSCs和]hAECs移植对PD大鼠旋转行为具有改善作用,二者可在动物脑损毁区存活较长时间而不被排斥,并分化成DA能神经元样细胞。首次通过行为学研究证明hAECs是较]hAD-MSCs更为理想的治疗PD的候选供体细胞。实验证明供体细胞产生生物学效应与其移植途径有关,就治疗中枢系统疾病而言,原位或局部移植优于静脉注射。
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