中药赤芍为我国传统中药,来源于毛莨科Ranunculaceae芍药属Paeonia芍药P.lactiflora Pall.或川赤芍veitchii Lynch的干燥根,具有清热凉血、散瘀止痛之功效。芍药苷为赤芍的主成分,含量最高可达8%,被认为是赤芍的指标性成分。现代研究证实,芍药苷具有抗血小板聚集、抗血栓、抗动脉粥样硬化、保护心肌细胞、改善微循环、抗炎、免疫调节、抗抑郁和抗肿瘤活性。本课题组前期研究表明,赤芍(基原植物P.lactiflora Pall.)水浸超声提取物经大孔吸附树脂和MCI柱色谱处理剔除芍药苷后,得到的一个分离部位CS-4在多种体内外模型上,仍具有抗炎、抗肝纤维化、抗过敏、抗氧化和抗糖尿病等活性。前期李瑞硕士(已毕业)已部分完成了该部位的研究,从中分离鉴定化合物49个,其中14个新化合物,部分化合物显示出较好的抗氧化活性,但未在其它药理模型上筛选出活性较好的化合物。为了深入发掘CS-4部位中其他新型活性成分,本课题通过凝胶Sephadex LH-20、HPLC等色谱分离手段,结合HRESIMS、NMR等波谱分析和计算ECD方法,从CS-4部位剩余组分中分离鉴定了化合物42个,包括单萜及其苷类化合物29个、倍半萜及其苷类化合物7个、木脂素及其苷类化合物5个以及苯酚类化合物1个,其中新化合物9个(化合物1*-9*),化合物1*4*为新芍药苷类化合物、化合物5*和6*为蒎烷型单萜酮类化合物、化合物7*-9*为杜松烷型倍半萜及其苷类化合物(化合物编号、名称与结构如Table 1和Figure 1所示)。根据前期CS-4的活性筛选结果,我们对本课题以及课题组前期从CS-4部位分离的18个芍药苷衍生物进行了抗过敏活性筛选。结果表明,1 1个化合物表现较好的抗过敏活性(EC50<100 μM),其中苯甲酰芍药苷可以显著降低RBL-2H3细胞的HIS和β-HEX水平(EC50值分别为6.88±1.30和26.31±2.2μM)。我们采用脱颗粒试验、HDC活性测定、序列与结构比对、ELISA试验、western blot和分子对接等方法,发现苯甲酰芍药苷通过占据HDC活性位点来抑制L-组氨酸向HIS的转化,同时抑制MAPK信号通路下游蛋白ERK1/2、JNK和p38,从而下调IL-3、IL-4、IL-5和IL-13的产生,并且可以减轻细胞骨架和线粒体膜的损伤。进一步体内活性评价,发现苯甲酰芍药苷对BALB/c小鼠具有显著的抗PCA作用。这也是首次发现苯甲酰芍药苷通过双重抑制HDC和MAPK信号通路发挥抗过敏活性。同时,基于时间荧光分辨(HTRF)法,发现化合物12和34具有较好PD-1/PD-L1体外抑制活性,IC50分别为33.8±1.7和57.4±3.2μM。但所分离到的化合物在细胞毒、神经保护、抗氧化等方面未表现出显著活性。