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目的:前期体内、体外研究均表明,来源于脐带间充质干细胞的微囊(h WJMSCs-MVs)可以有效的抑制膀胱肿瘤细胞(T24细胞)生长,但具体机制仍未明确。本实验通过应用人脐带间充质干细胞微囊作用于膀胱肿瘤细胞后观察膀胱肿瘤细胞内自噬水平的变化,研究微囊对膀胱肿瘤细胞自噬的影响及自噬体与肿瘤细胞凋亡的关系,并探讨其中可能影响到的信号通路。方法:(1)细胞培养:通过获得参与者知情同意后,将获取的新鲜脐带在无菌条件下进行贴壁原代培养,在标准的DMEM培养基中培养细胞待融合到80-90%时,采用1:2的比例对原代脐带间充质干细胞进行传代。细胞生长状态稳定后,取第3-6代进行实验。(2)微囊的提取及鉴定:取3-6代生长旺盛且细胞形态稳定的h WJMSCs,采用高速离心法提取微囊后,采用流式细胞仪对分离的微囊(MVs)进行鉴定,而后采用Bradford法对收集的微囊进行蛋白定量,并应用透射电镜h WJMSC-MVs观察微囊的大小及形态。(3)hWJMSC-MVs对肿瘤细胞的影响:应用h WJMSC-MVs处理膀胱肿瘤细胞后,透射电镜观察细胞内自噬体数量变化,Western Blot检测自噬体相关蛋白AKT,m TOR,p-AKT,p-m TOR,Beclin 1,Atg5-Atg12的变化,添加自噬抑制剂后再次观察。采用流式细胞仪技术检测添加自噬抑制剂前后细胞凋亡水平的变化。(4)应用SPSS软件进行数据分析。结果:(1)采用高速离心法从h WJMSCs中成功分离出MVs,并通过透射电镜观察到分离出的微囊并对其大小及形态进行测定。(2)微囊处理结果:h WJMSC-MVs处理后,T24细胞内的自噬体数量明显增加,自噬体相关蛋白Beclin 1,Atg5-Atg12表达增加。(3)自噬相关信号通路变化:Western Blot检测结果显示自噬相关信号通路AKT,m TOR未见明显变化,但p-AKT,p-m TOR表达增高。(4)加入自噬抑制剂3-MA后h WJMSC-MVs对T24细胞凋亡的影响:加入自噬抑制剂后T24细胞自噬受到明显抑制,肿瘤细胞凋亡数量也随之增加。结论:通过本次体外试验,我们得知人脐带间充质干细胞微囊能够通过AKT/m TOR信号通路引起膀胱肿瘤细胞自噬水平的变化,且在此自噬作为一种细胞自我保护机制削弱了微囊引起膀胱肿瘤细胞凋亡的作用,这为人脐带间充质干细胞微囊作为一种新型抗癌制剂应用于临床提供了进一步理论参考。