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目的通过构建人同源基因E2F-1逆转录病毒表达载体,观察过表达E2F-1基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响。方法应用基因重组技术将E2F-1基因克隆到逆转录病毒载体pLXSN中,进行酶切鉴定。重组体和逆转录病毒载体分别感染包装细胞PA317, RT-PCR检测转染效果,收集培养上清后通过感染NIH3T3细胞测定病毒滴度。重组体和逆转录病毒载体分别感染MGC-803细胞,Western bolt和RT-PCR检测感染情况,克隆形成实验、MTT法检测细胞增殖情况。结果(1)pLXSN-E2F-1经酶切鉴定证实与目的片断一致,表明重组体构建成功;(2)pLXSN-E2F-1重组体经RT-PCR检测证实E2F-1基因正确克隆进pLXSN;(3)NIH3T3细胞测定病毒滴度为2.4×105;(4)与MGC-803组和MGC-803/PLX组相比, MGC-803/PLX-E2F-1组E2F-1表达明显上调(P<0.05)。(5)MGC-803/PLX-E2F-1组细胞克隆形成率为48%,明显低于MGC-803组和MGC-803/PLX组;MGC-803/PLX-E2F-1组细胞的增殖率为MGC-803组的26.61%,明显慢于MGC-803组和MGC-803/PLX组(P<0.01)。结论成功建立E2F-1基因过表达的逆转录病毒包装细胞PA317,而且pLXSN-E2F-1成功感染MGC-803细胞;E2F-1过表达可抑制MGC-803细胞的增殖。目的观察含有转录因子E2F-1的重组逆转录病毒载体(pLXSN-E2F-1)对裸鼠人胃癌细胞移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响。方法建立人胃癌MGC-803细胞裸鼠移植肿瘤模型,随机分为pLXSN-E2F-1组,pLXSN组,生理盐水组。隔天向各组分别注射相应药物0.2ml,共7次,同时测量各组肿瘤体积。15天后处死裸鼠,显微镜下观察移植瘤组织形态变化,用免疫组化法、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测移植瘤中E2F-1基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数。结果与生理盐水组和pLXSN组比较,pLXSN-E2F-1组肿瘤生长速度明显减慢(P<0.05);病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织;免疫组化结果显示pLXSN-E2F-1组的肿瘤细胞细胞浆内有较多棕褐色颗粒沉着,pLXSN组和生理盐水组肿瘤细胞细胞浆内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着;半定量RT-PCR和Western-blot结果均显示pLXSN-E2F-1组E2F-1表达较pLXSN组和生理盐水组明显上调(P<0.05);pLXSN-E2F-1组的凋亡指数(15.4±4.1)%显著高于pLXSN组(8.3±2.2)%和生理盐水组(8.1±2.3)% (P<0.05)。结论逆转录病毒载体pLXSN-E2F-1瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长。