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目的:对广西苦玄参Picriafel-tarraeLout.的植物形态及其茎、叶进行生药学研究;按照药典规定制定苦玄参水分、浸出物、灰分、重金属等检查项目的限量范围;建立苦玄参的含量测定方法;初步建立一种通用性好、灵敏度高、简单快速及可适用于多种有机磷农药残留的定性定量分析方法。为建立苦玄参质量标准提供依据。
方法:采用生药学鉴别手段来观察药材性状、显微鉴别及理化鉴别特征;按照《中国药典》(2005版)药典附录规定的水分、浸出物、灰分等测定方法检测9批苦玄参药材,利用原子荧光分光光度法和电感耦合等离子体发射光谱法对其重金属含量进行测定;以苦玄参苷IA为指标,利用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)对其进行含量测定;以磷酸三丁酯为内标物,利用气相一质谱联用(GC-MS)法测定有机磷农药残留。
结果:1.显微鉴别:老茎横切面维管束连接成环,而嫩茎维管束则各自独立,老茎髓部较小且有草酸钙方晶,嫩茎则无,叶薄壁细胞含方晶;嫩茎非腺毛短而钝,老茎的长而锐,以上特征有鉴别意义。
2.理化鉴别:化学定性反应分析结果显示,苦玄参具有三萜皂苷的反应特征,5个产地的苦玄参全草冷浸液与回流提取液的紫外光谱扫描图与TLC鉴别均表明其各地成分差异不大。
3.检查项目:根据9批苦玄参测定的结果,我们将苦玄参药材的含水量标准规定为不得超过12.096;水溶性浸出物含量不得低于19.O%,醇浸出物含量不得低于18.O%;总灰分含量不得超过12.0%,酸不溶性灰分不得超过4.0%;龙州和宁明产苦玄参药材的重金属总量超过了国家规定的总量限量,5个产地苦玄参药材中的镉均超过国家规定的标准限量,其中龙州、平乐、宁明超标较严重,另外宁明苦玄参含铅量也轻微超标。
4.含量测定:本实验选用C18柱进行分析,流动相为乙腈-0.5%醋酸溶液(36:64),流速1m1·min-1,检测波长264nm,柱温20℃。实验结果显示相关系数r=0.9998,苦玄参苷IA在0.242μg~2.178μg范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率为98.26%,RSD=1.7%(n=6),广西5个产地的苦玄参药材中苦玄参苷I.的平均含量:龙州为O.20%、梧州为0.20%、苍梧为0.24%、平乐为0.25%、宁明为0.21%。5有机磷农药残留:以混合溶剂超声提取,提取物通过活性炭净化后进行GC-MS测定,选用SIM方式采集数据,5种农药回收率在72%~108%之间,RSD<12%。农药的最低检测限在5.12×10~μg/ml~1.27x10一。μg/m1之间。对5个产地苦玄参的有机磷农药残留量进行测定,结果均未检出有机磷农药。
结论:对广西苦玄参进行较系统的生药学研究,其性状、显微及理化特征可作为鉴别的参考依据;根据各项检查项目的数据可制定苦玄参的检查限量;RP-HPLC法简便、快速、准确性好、重复性好,可作为苦玄参药材中苦玄参苷IA的含量测定方法;GC-MS内标法测定苦玄参药材中的农药残留,方法简便快速、可靠、灵敏度高,可作为有机磷农药残留的定性定量方法。本实验可为制定苦玄参药材质量标准提供依据。