背景与目的:白发是人体到达一定年龄后衰老的一种外在表现,但是过早出现白发则会给人带来烦恼,造成自卑等社交障碍。现在,年轻人头发早白已成为社会的普遍现象,不仅影响形象,还会增加心理压力。白发症的原因有很多,往往因人而异,工作或生活压力大、遗传或疾病因素、缺乏营养或微量元素等都可能造成头发早白。目前,现代医学对白发症的治疗并无行之有效的方法和药物,大多数人为了美观多选用染发剂暂时覆盖头发原本的颜色,但是过量染发除了会破坏头发的保护膜、损伤头皮和毛囊、加速毛囊角质化、导致发质变细外,还可导致脱发甚至是重大疾病。酪氨酸酶(Tyrosinase)是黑色素合成的关键限速酶,它的活性对黑色素的合成起决定性的作用。现代医学认为,毛发早白的重要原因是黑色素细胞中的酪氨酸酶活性降低或丧失致使毛发中色素消失。一直以来,人们对色素疾病的病理及药物干预色素代谢的研究都集中在激活酪氨酸酶的活性上。黑芝麻为脂麻科脂麻的黑色成熟种子,含有丰富的脂类、蛋白质、黑色素、矿物质等,作为药食同源的物质,其具有显著的营养保健和医药治疗功效。中医学认为,人体毛发与肝、肾二脏的关系最为密切,而黑芝麻因具有补肝肾、益精血、润肠燥的作用,不仅频繁出现在乌发方剂中,现代药理研究亦表明黑芝麻具有乌发的潜能。另外,黑芝麻中的黑色素是一种良好的天然抗氧化剂资源,且可以从榨油后的芝麻粕中提取,具有广阔的应用前景,但目前对芝麻黑色素的研究主要集中在粗提物上。为了对黑芝麻黑色素的成分有进一步的认识,以及揭示黑芝麻的乌发机制,筛选出最佳活性成分,找出新的激活酪氨酸酶的有效单体成分,本课题开展了以下五部分的研究。(1)利用80%乙醇回流提取得到黑芝麻黑色素醇提总浸膏,再通过萃取、反复柱层析、重结晶等方法对黑色素的乙酸乙酯部位进一步分离纯化,得到的单体化合物,使用1H-NMR、13C-NMR鉴定结构。(2)采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法在体外测定黑芝麻黑色素的六种粗提物对酪氨酸酶活性的影响。(3)采用B16鼠黑素瘤细胞模型,以MTT法测定各组分对细胞增殖的影响,以多巴氧化法测定各组分对细胞内酪氨酸酶活性的影响,以NaOH裂解法测定各组分对细胞黑素生成量的影响。(4)采用斑马鱼作为实验动物,不同药物处理后,麻醉斑马鱼、拍照,Image J软件计算斑马鱼头部特定区域的光密度值,评价黑芝麻粗提物及单体化合物对斑马鱼胚胎黑色素代谢的影响。(5)将2.5%的氢醌作用于C57BL/6小鼠背部的剃毛区,模拟因酪氨酸酶活性降低而产生的白发症,从小鼠的一般状况、脏器指数及含黑色素的毛囊个数方面来分析黑色素醇提物A(为黑芝麻80%乙醇提取物)及单体化合物samin对小鼠脏器及毛囊中黑色素生成的影响。结果为:(1)从黑芝麻黑色素乙酸乙酯部位分离纯化得到4个单体化合物,分别鉴定为(+)-芝麻林素、(+)-芝麻脂素、samin和松脂素。(2)在终浓度1 mg/mL的同等浓度下,六种粗提物中黑色素醇提物A(为黑芝麻80%乙醇提取物)对酪氨酸酶的激活率最高,黑色素醇提物A的乙酸乙酯萃取部位、水萃取部位及黑色素水提物A(为黑芝麻水提取物)、黑色素水提物B(为黑芝麻80%乙醇提取后再以水提取的提取物)对酪氨酸酶的活性未表现出激活作用,黑色素醇提物A的正丁醇萃取部位激活效果不明显。(3)在25～200μg/mL浓度范围内,黑色素醇提物A、黑色素醇提物B(为黑芝麻水提取后再以80%乙醇提取的提取物)及黑芝麻蛋白提取液对B16鼠黑素瘤细胞的增殖、细胞内的酪氨酸酶活性及黑色素的生成均具有上调作用。(4)终浓度100μg/mL条件下,在分离得到的化合物中,samin对斑马鱼胚胎黑色素的生成促进作用最强,与对照组对比有极显著性差异。(5)实验结果表明黑色素醇提物A及samin对小鼠脾、胸腺、肝脏的指数没有影响,黑色素醇提物A可以增加小鼠含黑色素的毛囊个数。