乳腺肿瘤是犬猫最常发的肿瘤性疾病之一，犬乳腺肿瘤与人类的乳腺肿瘤在组织病理学和生物学上有相似的病理特征。如不考虑寿命等因素，犬乳腺肿瘤和人类乳腺肿瘤在肿瘤的发生年龄上也十分相似。由于犬作为人们喜爱的宠物，与人们生活在一起，与人们有着相似的生活环境和饮食习惯，接触的致癌物质相似。因此，犬乳腺肿瘤可以作为研究人类乳腺肿瘤的理想动物模型。肿瘤细胞培养技术是研究细胞癌变的机理机制、肿瘤的分子生物学特征和抗癌药物筛选的重要基础技术。因此，本实验在此基础上进行了以下工作：1.犬乳腺肿瘤组织的采集、病理学诊断与分类参照WHO新发布的犬乳腺癌分类分级方法，通过切片的HE染色方法对临床收集的52例犬乳腺肿瘤组织进行病理学诊断。结果显示在52例犬乳腺肿瘤中，良性乳腺肿瘤有20例，占总病例的38.5%，恶性乳腺肿瘤有32例，占总数的61.5%，本试验为犬乳腺肿瘤组织的消化、细胞的分离与培养、细胞的传代和鉴定奠定了基础。2.犬乳腺肿瘤组织中ZNF703定量测定试验通过real-time PCR技术对8例正常犬乳腺组织、20例犬良性乳腺肿瘤组织、32例犬恶性乳腺肿组织mRNA中ZNF703（锌指蛋白）的表达量进行检测。结果显示:不同犬乳腺肿瘤组织中ZNF703基因的平均表达量差异性很大。其中在8例正常乳腺组织样本中的表达量为3.07-19.06；在20例良性犬乳腺肿瘤组织样本中的表达量为10.85-43.16；在32例恶性犬乳腺肿瘤组织样本中的表达量为9.43-253.39。正常乳腺组织与良性乳腺肿瘤组织和恶性乳腺肿瘤组织ZNF703表达量均差异极显著（p<0.01），良性乳腺肿瘤组织与恶性乳腺肿瘤组织ZNF703表达量差异也极显著（p<0.01）。本试验结果为犬乳腺肿瘤组织的分子生物学诊断和分类提供新的参考方法。3.犬乳腺肿瘤细胞的分离、培养和筛选试验通过犬乳腺肿瘤细胞的分离、培养和筛选试验，筛选和培养出11株犬乳腺上皮肿瘤细胞株，其传代次数在10次以上，其中一株传代次数超过38代（CB-23），该试验为后续试验奠定了初步基础。4.犬乳腺肿瘤CB-23细胞株的鉴定试验按照肿瘤细胞的鉴定标准，分别对CB-23细胞株进行了生长曲线图的绘制，染色体数目分析，克隆形成试验，乳腺癌特异性抗体CA15-3的检测，动物接种成瘤等五方面的鉴定试验。结果显示该乳腺肿瘤细胞株生长快，倍增时间短，染色体平均为97条，比正常犬的染色体78条（39对）数目要多，单个细胞的克隆形成率高，乳腺癌特异性抗体CA15-3呈强阳性表达，小白鼠肿瘤细胞接种试验的成瘤率100%。通过鉴定说明，培养的该犬乳腺肿瘤细胞株符合犬乳腺恶性肿瘤的特性，对其继续培养，有望建立犬乳腺肿瘤细胞系。本试验为开展癌变机理和抗癌药物的筛选等研究奠定了初步的基础。5.犬恶性乳腺肿瘤组织中ZNF703含量与分离细胞株培养效果相关性的分析研究通过致癌基因ZNF703表达量与犬恶性乳腺肿瘤细胞株培养效果与传代时间的相关性的分析结果显示：癌组织中的ZNF703表达量相对越高，该细胞株的传代相对次数越多，含量最高的实体癌CB-23细胞株，到目前为已传了38代。该研究结果为直接筛选癌组织进行细胞培养提供参考，有一定的实用价值。