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研究背景：喉癌是最常见的头颈部恶性肿瘤之一,占全身恶性肿瘤的2-3%,其发病率和死亡率在上呼吸道肿瘤中居于第二位。近年来,对于喉癌诊断和治疗方面的水平有了很大提高,但是由于存在复发和淋巴结转移等不可控因素,喉癌患者的五年生存率仍得不到改善。因此在基因水平寻找新的治疗手段为当前急待解决的问题。MicroRNAs (miRNAs)是一类长度约为20-23个核苷酸的单链非编码RNA,它们主要通过与靶mRNA的3’UTR (untranslated region)区完全或部分互补配对而导致其降解或翻译受阻。已经证实,miRNAs的异常表达在肿瘤的发生发展中起着至关重要的作用。而miRNAs获得或缺失性实验进一步验证了许多肿瘤组织中异常表达的miRNAs可以作为癌基因或抑制基因发挥作用。因此,全面理解miRNA介导的生物功能和分子机制对于恶性疾病的诊断和治疗能够提供重要的依据。近年来,喉癌中miRNAs的表达水平及生物学功能也开始被验证。例如,在喉癌中表达下调的的let-7和miR-34c可以靶作用于ras, c-myc和c-met基因而发挥抑癌基因的作用。相反,在体内外,miR-21可以通过负性调控BTG2基因的表达促进喉癌细胞增殖而发挥致癌基因的作用。有研究显示miR-193a在头颈部鳞状细胞癌中表达频繁下调,但其在喉癌中的作用及分子机制仍不清楚。因此,深入研究miR-193a在喉癌中的表达状况及其功能,对研究喉癌的发生、发展和转移的机制具有重要意义,并将有利于喉癌的诊断、预后及治疗。研究目的：有研究显示miR-193a在头颈部鳞状细胞癌中表达频繁下调,但其在喉癌发生发展中的具体作用尚不明确,本研究主要探讨miR-193a-3p对人Hep-2喉癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及相关机制。研究方法：1、采用人喉癌细胞株Hep-2作为研究对象,于37℃、5%CO2条件下培养,培养基为含10%胎牛血清、1%青-链霉素混合液的RPMI 1640培养液。2、转染不同浓度的NC-FAM以优化转染条件,荧光显微镜观察转染率。实验分三组：miR-193a-3p mimics (A组)及阴性对照片段(B组)分别混合脂质Lipofectamine 2000,以未转染组(C组)作空白对照。3、实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)法检测细胞中miR-193a-3p的表达。4、MTT法检测细胞增殖情况。5、细胞转染48 h后使用Hochest33258染色观察细胞凋亡情况,同时按照AnnexinV-FITC和PI双染检测试剂盒说明进行染色,然后通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。6、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。7、运用TargetScan、PicTar和miRBase等软件对miR-193a-3p潜在的靶基因进行预测。8、Western Blot检测细胞中Mcl-1蛋白的表达情况。研究结果：1、转染条件优化后,确定六孔板miRNA转染终浓度为60nmol/L,脂质体体积为3pμl。2、细胞转染48h后,qRT-PCR检测提示A组miR-193a-3p表达较B、C组显著增加(P<0.05)。3、转染24后,MTT(Methyl thiazolyl tetrazolium)法分析显示A组细胞较B、C组增殖水平受到抑制(P<0.05),且在转染48小时后细胞抑制率较24小时差异更明显(p<0.05)。4、Hoechst33258染色及流式结果表明,A组细胞的凋亡率明显高于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05)。5、转染组穿过聚碳酸酯膜的细胞数明显少于阴性对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。6、利用靶基因预测软件检测后发现Mcl-1可能为miR-193a-3p的靶基因。7、Western Blot结果表明A组细胞Mcl-1蛋白表达水平较B、C组显著下调(P<0.05)。研究结论：miR-193a-3p可能通过调控人喉癌细胞株Hep-2中Mcl-1基因的表达,抑制细胞的增殖、侵袭能力,增强其对凋亡刺激的敏感性。