面对不同的环境压力,微生物进化出不同类型的RNA聚合酶的σ因子以启动不同的基因表达来应对不同环境对自身的影响。σS因子由rpoS基因编码,是微生物应对一般胁迫反应的主要控制因子。该因子主要控制着稳定期与逆境胁迫相关的多种基因的表达,在不同菌中它的调控模式不尽相同。施氏假单胞菌A1501是一株分离自水稻根际的联合固氮菌,该菌具有较高的耐盐能力,具有开发为一株耐盐固氮工程菌的优良潜质。为了研究该菌应对逆境胁迫的响应机制并初步探索A1501菌中一般胁迫反应因子RpoS（Sigma 38）与一般氮代谢因子RpoN（Sigma 54）之间的关联,本研究以A1501菌的RpoS编码基因为研究对象,通过突变株构建、固氮、抗逆等各种生理生化表型测定对RpoS的生理表型进行了鉴定,通过蛋白表达纯化以及凝胶阻滞试验开展了RpoS蛋白与靶标基因启动子区域互作机制的初步研究。取得的主要研究结果如下:1、蛋白序列比对发现A1501中的RpoS蛋白与已经报道的假单胞菌的序列高度同源,相似性约83%91%。与大肠杆菌中的RpoS蛋白相似性高达75%。构建了rpoS缺失突变株,正常条件下和压力胁迫下细菌生存能力试验表明rpoS缺失并不影响菌株在正常条件下的生长,但在含0.8M NaCl的培养基中表现出生存能力的下降。当用1.3 M NaCl冲击、48℃热冲击处理及长时间饥饿处理后,突变株相对于野生型存活率均明显下降。2、在低铵、微好氧条件下,rpoS基因突变后其固氮能力与野生型没有明显变化,但是当培养体系中加入0.2M NaCl后,rpoS突变株酶活水平只有野生型的50%左右,而且在5小时后进入平台期,不再有新的乙烯生成。可能的原因是rpoS基因的突变影响了菌株的生存能力进而影响了固氮酶的表达,亦可能在逆境条件下,RpoS与氮代谢调控因子RpoN存在互作。3、通过生物信息学的方法,结合已报道的大肠杆菌的基因芯片结果,从A1501基因组中注释出了100多个可能受RpoS蛋白调控的基因。从中选择10个基因,1.0M NaCl冲击后观察它们在转录水平的表达差异。结果显示有9个基因在rpoS突变株中的表达量降低,表明A1501的RpoS调控与大肠杆菌非常相似。4、在大肠杆菌BL21 （DE3）菌株表达了RpoS蛋白,通过双内含肽介导的纯化系统对其进行亲和纯化。选择A1501在盐冲击条件下表达量发生明显下调的三个基因,扩增其基因上游250 bp的序列,通过凝胶阻滞实验发现它们都能与σS结合。进一步的截短试验发现RpoS蛋白识别的otsBA基因启动子区位于该基因上游50bp的序列中。对这段序列进行分析发现,该启动子区具有大肠杆菌中报道的σS识别的启动子保守序列CTA***T。而对其他基因启动子区的序列分析发现该序列可能出现在不同于otsBA基因启动区的其他位置,而在有的基因中并没有这种保守性存在。表明A1501菌在目的基因的识别上存在着菌株特异性。本研究对揭示施氏假单胞菌A1501的抗逆境胁迫机制及进一步开展RpoS对靶基因启动子的识别规律研究和基因组水平的表达调控单元鉴定奠定了重要理论基础。