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氧化是造成脑功能障碍,记忆力降低和形成老年性痴呆的诱因之一。磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)具有增加记忆、抗老年性痴呆的作用。PS是通过抗氧化发挥其作用的吗?本论文以动物脑和海马神经元为实验材料验证PS的抗氧化作用。1、动物脑组织中PS的薄层分离测定以(VC氯仿):V(无水乙醇):V(三乙胺):V(水)=10:11.3:11.7:2.7为展开剂,以0.3%的溴百里香酚水溶液(P≥7)作为显色剂,对四种动物(牛、羊、鸡、鱼)脑组织中磷脂成分进行了薄层层析分离和扫描定量,每100g磷脂中PS的含量分别是20.5g,19.3g,18.7g,17.0g,该法分离,显色效果好。2、动物脑PS的提取、分离、纯化采用有机溶剂萃取法,用9-12倍量的丙酮去除脑中95%的胆固醇,采用乙醚(或正已烷)从脑中提取99%的总磷脂,按乙醚液:Na2CO3溶液(PH=10)=1:1～4,搅拌均匀,二次冷冻,二次静置分层,底层的黄色溶液即为PS,经薄层分析检验知为单一成分。3、动物脑PS的脂肪酸种类分析对上述四种动物脑提取的PS分别进行甲酯化、然后用GLC分析,结果:冷冻干燥原料提取的PS比烘干脑原料提取的PS含更多的不饱和脂肪酸,四种动物脑均含有饱和脂肪酸(14:0,18:0),单不饱和脂肪酸(16:1,18:1),n-3多不饱和脂肪酸(18:3n,20:5n,22:5n,22:6n)和n-6多不饱和脂肪酸(18:2 n,20:2 n,20:3n,20:9 n,22:4 n,22:5 n),而以鱼脑中多不饱和脂肪酸为最高达52.24。4、PS抗H2O2引发的鼠脑功能障碍有关记忆和脑功能障碍的研究人们普遍接受Morris(1984)的水迷宫实验。以Wistar雄性幼鼠为实验动物,动物分为8组:空白对照(A)组;15mg H2O2/kg/次/天(B)组,30 mg H2O2/kg/次/天(C)组,和30 mg PS/kg/次/天(D)组。和二个组先分别给15 mg H2O2/kg/次/天(E)组,30 mg H2O2/kg/次/天(F)组,6h后依次分别给同量的PS。另二个组先给15 mg PS/kg/次/天(G)组和30mg PS/kg/天(H)组,6h后依次分别给同量的H2O2,H2O2和PS稀释成0.3ml左右,腹腔注射,实验结果如下:①D和A组相比,D组游泳时间最短(P<0.05),距离最短(P<0.05)。B、C和A组相比,B、C组游泳时间最长(P<0.01)游泳距离最长(P<0.01) E、F、G、H各组和A组相比,游泳时间较长,距离较长(P<0.01)。②HE染色后观察海马细胞。根据Satoru,等(1999)的死亡细胞分级(%)级别,A、D组为1级,B、E、F、H各组为2级,C组为3级。③鼠脑中成分的变化(1)脂褐素含量(u/g组织)A组219.2±7.5,C组422.6±87.2,B、E、F、G、H组脂褐素含量在249.8±82.5和343.6±72.3之间。而D组为93.7±38.5,表明了H2O2的氧化作用和PS的抗氧化作用。(2)MAO-B活化,A组为45,C组为100,D组为35。B、E、F、G、H各组在29-72之间,表明H2O2能引起脑单胺氧化酶升高,PS能降低单胺氧化酶的活性。(3)Ach含量。A组为14.3±3.22,C组为8.76±1.88,D组为17.89±3.71。B、E、F、G、H各组Ach在11.56±2.13到14.3±3.22之间。表明H2O2能降低Ach含量,PS能升高Ach含量。5、PS抗H2O2引发的鼠海马神经元凋亡新生大鼠(24h内)的海马神经元,加入1.5、15,150mg/L的PS预保护细胞24h后以10-2g/L H2O2刺激24h取样测定细胞凋亡率。分别为27.17±2.05,16.17±2.21和37.17±2.45。表明了PS的抗凋亡作用。用Confocal测细胞内Ca2+浓度,分别为4.03±1.24,24.50±2.12和-(15±3.02)表明PS影响神经元的Ca2+浓度,但过高浓度可能有损害作用。本论文创新点:1、从动物脑组织提取分离,纯化PS的方法和薄层分析方法。2、从水迷宫实验及其鼠脑成分分析,H2O2能够造成脑氧化损伤。PS能抗H2O2引发的鼠脑受氧化损伤形成的功能障碍。3、PS能抗H2O2氧化引发的海马神经元凋亡,这种拮抗作用与Ca2+有关。