论文部分内容阅读
鸡马立克氏病(Marek’s disease,MD)是一种由鸡马力克病病毒(Marek’s disease virus,MDV)引起的淋巴细胞增生性肿瘤疾病,在全世界范围内的家禽养殖行业都有流行,每年会对家禽养殖业造成巨大的经济损失。鸡对MD的抗性机制十分复杂,通常是在多个基因的共同作用下实现的。单核苷酸多态性(Singlenucleotidepolymorphism,SNP)是人类和动物基因组中最为常见的一种遗传变异类型,能够反应出个体遗传抗性的差异。目前,已鉴定出大量与鸡对不同疾病抗性或易感性相关的SNP位点,深入研究发现,在白莱航鸡基因组范围内存在两个与马立克氏病抗性相关的SNP位点,分别是位于基因SMOCI的内含子7中的rs14527240和基因PTPN3的内含子22中的GGalu GA156129(编号rs312873078),且这两个基因的表达与肿瘤形成有显著相关性。本研究通过对6500只青脚麻鸡进行基因组DNA提取、PCR扩增和限制性内切酶酶切完成了SMOC1基因和PTPN3基因SNP点突变的筛选,发现在青脚麻鸡中存在不同的基因型,其中SMOC1基因的纯合突变(GG)个体占1.93%,PTPN3基因纯合突变(GG)个体占28.03%,两个基因同时突变个体占0.246%;筛选出纯合突变的公鸡3只,母鸡13只,存活公鸡2只,母鸡10只。为了进一步探究这两个SNP位点突变类型与青脚麻鸡对马立克氏病抗性的相关性,对挑选出的含纯合突变位点鸡的抗性品系后代和非纯合突变鸡的后代共87只进行马立克氏病超强毒株Md5攻毒实验,将Md5分别腹腔接种1日龄(2000PFU/只)不同基因型雏鸡并饲养97天,分别在攻毒后第46天(第一批)和97天(第二批)进行了屠宰和样本采集。经检测,从攻毒鸡脾脏组织基因组DNA中均能扩增出MDV致瘤基因meq的特异性条带,表明本实验攻毒感染率为100%。第一批随机抽取了12只实验鸡剖杀采样,未发现典型肿瘤病变;受疫情期间出行政策的影响,第二批仅随机挑选8只实验鸡进行了剖杀采样,其中有3只鸡(均为SMOC1基因GG型和PTPN3基因GA型,作为病例组)表现出典型的马立克氏病发病症状,另五只鸡(SMOC1基因型为非GG型,PTPN3基因型为GG型,作为健康组)解剖观察均表现正常,截至实验结束未出现死亡病例。取病变和正常的肝脏和心脏组织制作组织切片,观察到病变组织发生了明显的病理变化。结合基因型与发病情况的统计,经过相关性分析,本实验得出结论,在青脚麻鸡中,SMOC1Sr基因GA/AA型与鸡对马立克氏病的抗性相关(P<0.05),PTPN3基因GG型与鸡对马立克氏病的抗性相关(P<0.05)最后,通过荧光定量PCR对SMOC1,PTPN3,IFN-γ,IL-1β,IL-6,IL-8和IL-18基因的相对表达量进行检测,发现与健康组相比,发病组鸡脾脏组织中SMOC1基因的表达量显著升高(P<0.05),PTPN3基因的表达量无显著差异;发病组和健康组相比,IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-18的细胞因子的表达都有升高,但未达到显著水平(P>0.05)。根据分析结果,可以得出结论,SMOC1基因的表达与肿瘤发生具有相关性;个体细胞因子IFN-γ、IL-1β、IL-8和IL-18等的表达在不同的基因型间无显著性差异。