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本论文以喹乙醇(OLA)为研究对象,合成了喹乙醇半抗原(OLA-HS),偶联载体蛋白BSA和OVA,制备得到人工抗原(OLA-HS-BSA和OLA-HS-OVA),免疫小鼠,通过杂交瘤技术进行细胞融合,筛选获得1株杂交瘤细胞283,并制备了相应的单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb),在此基础上开展以镧系元素铕为探针的直接竞争时间分辨荧光免疫分析技术(dcTRFIA),并与常规酶联免疫吸附实验(ELISA)和传统的仪器分析方法(HPLC)进行对比。主要研究内容如下：1. OLA-HS-BSA和OLA-HS-OVA的制备与鉴定琥珀酸酐法合成OLA-HS,采用薄层色谱(TLC)、显微熔点仪以及质谱进行鉴定,均证明半抗原合成成功。活化酯法合成OLA-HS-BSA和OLA-HS-OVA,紫外扫描(UV)及凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,紫外扫描图谱显示新合成物质的最大吸收波长发生偏移,SDS-PAGE电泳条带显示OLA-HS-BSA和OLA-HS-OVA的迁移速度较各自的载体蛋白BSA和OVA慢,证明载体蛋白上成功偶联上了一定数量的半抗原,表明OLA-HS-BSA和OLA-HS-OVA合成成功。将OLA-HS-BSA免疫小鼠,间接ELISA测血清效价,icELISA测其灵敏度,结果显示1号小鼠血清效价最高,对OLA半数抑制浓度(IC5o)为183.3ng·mL-1,免疫效果好。2.喹乙醇单克隆抗体(OLA-mAb)的制备及其免疫学特性鉴定采用杂交瘤技术筛选得到一株可稳定分泌OLA-mAb的细胞株283,体内诱生法大量制备腹水,辛酸-硫酸铵法纯化腹水,BCA法测得纯化后腹水蛋白浓度为3.65mg·mL-1。抗体特性鉴定表明OLA-mAb的类型及亚型均为IgG1,轻链为K链,对OLA的IC50为33.96ng·mL-1。特异性鉴定结果显示OLA-mAb除与卡巴氧的交叉反应率达到3.6%外,对其他结构类似物的交叉反应率均小于0.18%。以上结果表明实验获得了高灵敏度、高特异性的OLA-mAb,可用于后续免疫分析方法的建立。3. dcTRFIA分析方法的建立本实验的关键是建立了一种以Eu3+为探针的dcTRFIA方法,采用金属螯合剂环化二乙烯三胺五醋酸酐(cyD PA)将Eu3+与OLA-mAb偶联,制备铕标抗体(Eu3+-OLA-mAb)。优化增强液配方,确定其中的TTA、TOPO浓度分别为0.45mol·L-1和0.5mol·L-1, pH为3.0。开展dcTRFIA最佳反应条件的优化实验表明,其包被原最佳浓度为1.0μg·mL-1, Eu3+-OLA-mAb最佳稀释度为1000倍稀释；最佳包被缓冲液为0.05nol·L-1, pH为9.6的CBS; Eu3+-OLA-mAb最佳稀释液为0.01mol·L-1, pH为7.0的PBS; OLA标准溶液配制时的最佳有机溶剂为含5%甲醇的PBS。条件优化后进行标准曲线拟合,得到一条S型曲线,其IC1o和IC50值分别为0.83ng·mL-1和12.64ng·mL-1。对饲料、池塘水、自来水及超纯水分别添加2.5ng·mL-1ng·mL-1的OLA标准品,其回收率处于74.40%～138.25%之间,变异系数小于15%。经HPLC验证,dcTRFIA分析灵敏度高,稳定性良好,潜在应用价值非常高。4.间接竞争酶联免疫吸附测定(icELISA)分析方法的建立通过对icELISA法进行一系列优化,得到一条S型曲线,其IC10和IC50值分别为1.03ng·mL-1和21.83ng·mL-1。对饲料、池塘水、自来水及超纯水分别添加2.5ng·mL-1～50ngmL-1的OLA标准品,其回收率处于77.00%～127.05%之间,变异系数小于11%。