【摘 要】
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梨菇,属红菇科（Russulaceae）,红菇属（Russula）,是蓝黄红菇彼特卢变型,常见于福建和江西的夏季阔叶林中,单生至群生。梨菇含有丰富的矿物质,碳水化合物和蛋白质,是我国常见药食菌之一。为了更好开发和利用梨菇资源,本文优化了梨菇多糖的提取工艺,对粗多糖进行分离纯化得到四种纯化多糖,并对梨菇纯化多糖的结构进行解析,通过体外细胞实验对其进行生物活性评价。本文主要研究结果如下:（1）本文采用
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梨菇,属红菇科（Russulaceae）,红菇属（Russula）,是蓝黄红菇彼特卢变型,常见于福建和江西的夏季阔叶林中,单生至群生。梨菇含有丰富的矿物质,碳水化合物和蛋白质,是我国常见药食菌之一。为了更好开发和利用梨菇资源,本文优化了梨菇多糖的提取工艺,对粗多糖进行分离纯化得到四种纯化多糖,并对梨菇纯化多糖的结构进行解析,通过体外细胞实验对其进行生物活性评价。本文主要研究结果如下:（1）本文采用响应面法,对梨菇多糖的超声辅助热水浸提工艺进行优化,优化后的工艺参数:热水提取温度85℃,料液比1:30,提取时间180 min,超声时间25 min。在此优化条件下,平均多糖得率为9.03±0.97%。粗提物经过D354FD大孔树脂脱色和Sevag法脱蛋白处理后,得到粗多糖RCPs。（2）分离纯化及理化性质研究:采用DEAE-52纤维素离子交换树脂从粗多糖中分离出两种均一性纯化多糖RCP-Ⅰ和RCP-Ⅱ和两种大分子多糖化合物RCP-Ⅲ和RCP-Ⅳ,其中RCP-Ⅰ和RCP-Ⅱ的重均分子量Mw为15138 Da和16455 Da。RCPs,RCP-Ⅰ,RCPⅡ,RCP-Ⅲ和RCP-Ⅳ总糖含量分别为53.38%,84.10%,85.96%,89.65%和87.25%,蛋白含量分别为6.09%,0.97%,0.24%,4.74%和3.35%,均不含淀粉;其中RCPs,RCPⅠ和RCP-Ⅳ含有少量糖醛酸（4.08%,1.36%和2.29%）,RCP-Ⅱ和RCP-Ⅲ不含糖醛酸。（3）RCP-Ⅰ和RCP-Ⅱ结构表征:对两种分子量较小的均一性多糖RCP-Ⅰ和RCP-Ⅱ的结构进行表征。根据结果推断,RCP-Ⅰ的一级结构的主链主要由T-α-D-Glcp,T-α-DManp,T-β-L-Fucp,1,6-α-D-Galp和1,2,3,6-β-D-Glcp组成。RCP-Ⅱ的一级结构主要由T-α-D-Glcp,1,6-α-D-Galp,1,3-β-D-Glcp,T-α-L-Fucp,1,2-α-D-Manp,1,4-β-D-Glcp,1,5-α-D-Araf和1,3,6-α-D-Manp组成。RCP-Ⅰ和RCP-Ⅱ均无三螺旋结构;电镜下的RCP-Ⅰ和RCP-Ⅱ的形态都呈现较为紧实的无序片状结构,RCP-Ⅰ的表面形貌呈平整光滑状,而RCP-Ⅱ的表面形态略显粗糙。（4）体外抗氧化,α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制实验表明,RCP-Ⅲ对三价铁离子的还原能力最强,RCP-Ⅳ对·OH的捕捉能力最强;此外,RCPs和RCP-Ⅲ对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的活性都有抑制作用,而其他几种纯化多糖对α-葡萄糖苷酶的活性几乎没有抑制作用,对α-淀粉酶的活性有抑制作用,且抑制率均达到50%以上。这可能由于其结构的差别导致的。（5）探究梨菇多糖对三种癌细胞HepG-2,A549和C666-1的抑制作用及体外免疫调节活性。结果表明,RCP-Ⅰ对肿瘤细胞的抗增殖作用最强,能够抑制的细胞系种类最多,RCPs次之,这可能是由于结构的差异导致的作用机理差异。此外,粗多糖和四种纯化多糖在中高浓度下（125-500μg/mL）不仅能够增强巨噬细胞RAW264.7的吞噬能力,还通过上调其免疫因子iNOS,TNF-α和IL-6的mRNA的表达量,来增加NO,TNF-α和IL-6的积累量,从而达到免疫调节的作用。本研究结果表明,梨菇多糖具有发展为功能性因子的潜力,应用于生物医学及功能性保健食品领域;本文以期为梨菇多糖资源的开发奠定一定的基础。
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