论文部分内容阅读
药物靶向肝脏有被动靶向及受体介导的主动靶向两种方式。本文将上述两种靶向原理相结合,以合成的具有肝脏靶向性的半乳糖化壳寡糖作为载体材料,使用微乳化-凝胶法制备了适合包裹水溶性阴离子药物的肝靶向壳寡糖纳米粒。以半乳糖为原料,经乙酰化、溴代、缩合、置换、加醇等反应,合成了具有肝靶向意义的半乳糖苷：2-亚氨基-2-甲氧基乙基-1-硫代-β-D-半乳吡喃糖苷(2-imino-2-methoxyethyl-l-thio-galactose, IME-thio-galactose)首次使用IME-thio-galactose对壳寡糖的氨基进行了修饰以合成具有肝靶向性质的载体材料—半乳糖化壳寡糖,并以IR、DSC及1H-NMR等方法对其结构进行了表征。研究了微乳化-凝胶法用于制备包裹水溶性药物的壳寡糖纳米粒,发现由于壳寡糖在水溶液中带有正电荷,在静电吸引的作用下,该方法制备的纳米粒对阴离子药物能得到较高的包封率。以span-80为乳化剂,甘油为助乳化剂,液体石蜡为油相,先对壳寡糖水溶液进行微乳化制备W／O微乳,然后加入Na2S04溶液对壳寡糖进行胶凝,得到壳聚糖纳米粒。采用甘草酸二铵为模型药物,按最佳处方制得的甘草酸二铵壳寡糖纳米粒(DG-COS-NPs)平均包封率88.3%,载药量为29.4%。同法,使用半乳糖化壳寡糖的1%醋酸溶液代替壳寡糖水溶液,制得甘草酸二铵半乳糖化壳寡糖纳米粒(DG-GAL-COS-NPs),包封率为87.4%,载药量29.1%。测定了DG-COS-NPs和DG-GAL-COS-NPs在生理盐水中的平均pH值均在6.0左右。采用激光粒度仪测定粒径分布,DG-GAL-COS-NPs的平均粒径在72.8 nm,显示为单峰分布。用1%磷钨酸溶液染色,固定5min,于透射电镜下观察纳米粒的形态并照相,结果表明,DG-GAL-COS-NPs呈球形或类球形,分布较均匀,相互之间无粘连。加速试验和长期稳定性实验表明,两种纳米粒冻干制剂在(25±2)℃加速试验条件下和(4±2)℃长期稳定条件下放置3个月,外观、pH值、粒径和包封率均无显著性变化,稳定性良好。在去离子水中,纳米粒在10min内突释16%,然后释药缓慢,48h时仅释放38%；然而在PBS缓冲液(pH=7.0,150mmol·L-1)中,48h时能够释药完全(91%)。根据其释药规律推测甘草酸二铵壳寡糖纳米粒的释药机制为依赖离子交换作用释放药物。使用溶血性试验和细胞毒性试验(MTT法)初步验证了COS-NPs和GAL-COS-NPs两种纳米粒的安全性。小鼠体内分布试验结果表明：靶向组(DG-GAL-COS-NPs)与未修饰对照组(DG-COS-NPs)都具有较高的肝脏累积药物浓度。对照组受粒径大小的影响,具有肝脏的被动靶向性,靶向组经半乳糖修饰后,较对照组,其肝脏靶向效率提高了1.52倍,表明半乳糖化壳寡糖纳米粒可被去唾液酸糖蛋白受体识别而被肝细胞主动摄取。采用COS-NPs和GAL-COS-NPs包裹荧光物质-荧光素二钠作为标记,给药后30min处死小鼠,制备肝组织切片,荧光显微镜下观察荧光分布和强度,结果表明GAL-COS-NPs组荧光强度较强,且主要分布在肝小叶的实质细胞区。综上所述,以半乳糖化壳寡糖为载体材料,采用微乳化-凝胶法制备的肝靶向壳寡糖纳米粒有望成为水溶性阴离子药物的一种良好肝靶向载体。