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背景及目的华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom macroglobulinemia,WM)是一种以分泌单克隆免疫球蛋白M(IgM)为主要特征的惰性B细胞淋巴瘤。MYD88L265P CXCR4S338X是近年来在WM患者中发现的重现性体细胞突变。在临床实践中,WM和同样分泌单克隆IgM的其他惰性B细胞淋巴瘤鉴别诊断较为困难。有研究显示,WM患者的血清CXCL13水平较正常人显著升高,可能有助于WM的诊断。因此,本研究旨在探索血清CXCL13水平在WM诊断和疗效评估中的意义,以及CXCL13在WM发病机制中的可能作用。另外,近年来循环肿瘤DNA(ctDNA)在许多实体肿瘤和淋巴瘤中已经被证实是一种无创、高敏感度的突变检测方法。我们尝试利用WM患者外周血游离循环DNA(cfDNA)检测其中MYD88L265P CXCR4S338X突变,并将检测结果与骨髓样本结果相比较,计算cfDNA检测MYD88L265P突变的敏感性和特异性,为未来外周血cfDNA在WM患者诊断和疾病监测中的应用打下基础。方法收集2015年1月至2018年5月北京协和医院就诊的WM患者(n=132)、伴单克隆IgM的DLBCL(n=13)、伴单克隆IgM的其他惰性B细胞淋巴瘤(n=14)、IgM型MGUS(n=10)患者的血清,检测血清CXCL13水平,并结合临床资料、危险分层、治疗反应等进行分析。收集WM患者(n=16)和对照组包括伴有单克隆IgM的DLBCL患者(n=2)、其他惰性B细胞淋巴瘤(n=2)、IgM型MGUS患者(n=3)的骨髓活检蜡块标本,进行抗人CXCL13抗体、抗人CD117抗体、抗人肥大细胞Tryptase抗体免疫组化染色,分析WM患者与对照组患者骨髓标本中免疫组化染色情况。收集WM患者骨髓血5例,进行体外CXCL13趋化实验,研究CXCL13对WM患者骨髓各群细胞的趋化作用。收集2017年12月至2018年6月北京协和医院就诊的WM患者外周血样本31例、WM向DLBCL转化患者1例、和DLBCL患者 1 例的外周血,提取 cfDNA,Real-time AS-PCR 检测 MYD88L265P CXCR4S338X突变,与组织样本突变检测结果对比,并分析cfDNA检测MYD88L265P突变的敏感性和特异性。结果41例初治WM患者的中位血清CXCL13水平为2483.0(36.8-5644.0)pg/ml,较 sWM(35.6,27.7-549.6)pg/ml(p=0.02)、IgM 型 MGUS 患者(33.5,20.8-873.3)pg/ml(p<0.0001)和健康人(26.6,14.0-98.3)pg/ml(p<0.0001)显著升高。伴有单克隆IgM的DLBCL和其他惰性B细胞淋巴瘤患者的中位血清CXCL13水平分别为 1057.0(105.0-5204.0)pg/ml 和 380.9(23.8-5518.0)pg/ml,较健康人亦显著升高(p<0.0001)。另外,初治WM患者的血清CXCL13水平显著高于伴有单克隆IgM的其他惰性B细胞淋巴瘤患者(p=0.01)。联合血清CXCL13和M蛋白水平诊断WM,ROC曲线下面积为0.935,当血清CXCL13>3250 pg/ml、血清M蛋白>38 g/L时,诊断WM的敏感性和特异性分别为98%和85%。同时,在WM患者中,血清CXCL13水平与同期HGB呈负相关(rho=0.49,p<0.0001),与M蛋白(rho=0.47,p<0.0001)和IgM(rho=0.43,p<0.0001)水平呈正相关。治疗后血清CXCL13水平变化与M蛋白变化水平一致,且较M蛋白更敏感,在治疗早期即可出现下降,不会受到IgM flare的影响。骨髓免疫组化染色发现,WM患者骨髓中CXCL13水平和CD117/Tryptase阳性肥大细胞的数量明显高于伴有单克隆IgM的其他惰性B细胞淋巴瘤和IgM型MGUS患者。体外实验也证实,CXCL13能趋化WM患者骨髓中CD19阳性肿瘤细胞和CD117阳性肥大细胞。31例WM患者血浆中提取到的中位cfDNA水平为95.7(19.6-4330.8)ng,1例WM 向 DLBCL 转化患者 cfDNA 为 2054.0 ng,1 例 DLBCL 患者提取 cfDNA 114.8 ng。在28例患者中对比其同时期外周血cfDNA和组织标本gDNA中MYD88L265P突变检测结果,cfDNA检测MYD88L265P突变敏感性95%,特异性83%。结论血清CXCL13在WM患者中显著升高,且与肿瘤负荷相关,测定血清CXCL13水平有助于WM患者的诊断。治疗后WM患者中血清CXCL13下降与M蛋白一致,且更敏感,不受IgM flare影响,对于WM患者疗效评估具有一定价值。WM患者骨髓CXCL13和肥大细胞水平显著高于单克隆IgM型MGUS和其他惰性B细胞淋巴瘤患者。高CXCL13的趋化作用以及所趋化的肥大细胞浸润增多可能与WM发病机制相关。Real-time AS-PCR 检测 WM 患者 cfDNA 中 MYD88L265P 和 CXCR4S338X 突变是可行的,cfDNA中检测MYD88L265P突变敏感性和特异性分别为95%和83%。