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水禽是禽流感病毒的天然宿主,也是流感病毒重组的供体片段来源和散播病毒的重要传染源,在禽流感病毒传染过程中扮演重要角色。先前报道显示,水禽在自然条件下感染禽流感病毒并不会引起发病和死亡,但自2002年以来,禽流感病毒对水禽的致病力逐渐增强,死亡率也逐渐上升,因此加快开展禽流感病毒对水禽的致病性研究尤为重要。研究证实,miRNA在多种生物体内参与了病毒与宿主细胞相互作用的调控,并介导了病毒潜伏性感染的发生和维持,但禽流感病毒感染对水禽mi RNA表达谱的影响,以及这些差异表达的miRNA在禽流感病毒与水禽相互作用中所扮演的角色鲜有报道。本研究选取一株鸭源H5N1亚型禽流感病毒DK383株进行研究,DK383感染番鸭后可以导致肺和脑组织损伤,最终引起番鸭的死亡。DK383造成的肺和脑组织损可能伤与IL-6、IL-10和TNF-α等细胞因子过表达有关,体外实验也表明,DK383感染番鸭DEF后同样也引起了IL-12、IL-6、IL-10和TNF-α等细胞因子的表达失调。本研究采用高通量技术分别分析了DK383株禽流感病毒感染番鸭DEF 12h和24h后mi RNA表达谱的变化,并进行GO富集分析。结果显示:与Control组相比,DK383病毒感染DEF 12h和24h后,分别有44个和54个miRNA的表达显著变化,两个时间点表达变化趋势一致的mi RNA有18个。GO富集分析显示,这些表达量显著变化的miRNA,可能对细胞免疫应答反应、细胞表达谱的负调控、细胞的生长、分化等生物学功能有调控作用。禽流感病毒感染引起的免疫应答反应中,细胞因子发挥着重要作用。为了探索mi RNA在禽流感病毒感染水禽过程中扮演的角色,我们选取了具有多种免疫调节功能的细胞因子-白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)开展研究。在禽流感病毒感染早期,IL-12可以调控IFN-γ的产生,抑制禽流感病毒的复制,提高特异性CTL细胞的应答能力,在抗禽流感病毒免疫应答反应中扮演着重要的角色。DK383病毒感染后,可引起DEF内IL-12表达增加。通过靶基因预测软件对DK383感染后miRNA表达谱进行分析,显示mi R-6125、miR-2974、miR-138a、miR-196、miR-196a和mi R-196a-5p这6条miRNA可能对IL-12的表达有调控作用。通过利用荧光定量PCR、Western blot、双荧光素酶报告系统等技术,发现miR-6125通过与靶基因IL-12的3,UTR结合,引起IL-12 mRNA的降解抑制其翻译的进行,最终抑制靶基因IL-12的蛋白表达,即miR-6125可以靶向调控IL-12的表达。本研究利用噬斑技术和荧光定量PCR进一步探索了miR-6125对DK383株禽流感病毒复制和番鸭DEF细胞因子IFN-α、IFN-γ、IL-10和TNF-α表达的影响。结果表明,过表达mi R-6125可以促进禽流感病毒在番鸭DEF内的复制,下调IFN-α、IFN-γ、IL-10和TNF-α表达。本研究通过分析禽流感病毒感染番鸭DEF 12 h和24 h后miRNA表达谱的变化,筛选出了可以影响番鸭DEF内细胞因子表达和禽流感病毒复制的miR-6125,为深入理解水禽miRNA在宿主抗流感天然免疫反应与禽流感病毒致病性之间的调控作用奠定了基础,对于开发新策略用于防治禽流感病毒具有重要的理论和实践意义。