肿瘤微环境中的趋化因子受体7介导的人类结肠癌细胞淋巴结转移机制的研究

被引量 : 0次 | 上传用户:guofeng1988
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
第一部分体外研究次级淋巴组织趋化因子/趋化因子受体7对稳定转染SW480细胞株的基质金属蛋白酶9表达调控目的在稳定转染CCR7-shRNA质粒细胞株SW480/CCR7ˉ和阴性对照质粒细胞株SW480/control中检测次级淋巴组织趋化因子(secondary lymphoid tissue chemokine, SLC/CCL21)对基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9, MMP-9)蛋白水平和酶活性的调控,分析次级淋巴组织趋化因子/趋化因子受体7(CC chemokine receptor 7,CCR7)对MMP-9的影响。方法0ng/ml和100ng/ml CCL21处理SW480/CCR7"和SW480/control细胞24小时后,酶联免疫吸附试验测定细胞上清中的MMP-9蛋白水平;明胶酶谱法检测其酶活性。结果100ng/ml CCL21能够明显刺激SW480/control细胞中MMP-9蛋白水平和酶活性升高,差异有统计学意义(P<0.05);在抑制CCR7表达的SW480/CCR7ˉ细胞中,CCL21的刺激作用则不明显,CCR7基因沉默能够阻断CCL21诱导的MMP-9上调。结论CCL21通过作用于肿瘤细胞表面的CCR7能够诱导人结肠癌细胞株SW480MMP-9表达上调。第二部分体内研究CCL21/CCR7对结肠癌MMP-9表达调节和淋巴结转移的影响目的在裸鼠移植瘤模型中研究CCR7的表达沉默对肿瘤组织中MMP-9的蛋白水平和酶活性的影响;对肿瘤生长和淋巴结转移的影响以及对裸鼠生存期的影响。方法按照种植SW480/CCR7-和SW480/control细胞将裸鼠分为SW480/CCR7-和SW480/control组。采用活体荧光成像技术观察裸鼠移植瘤的生长和荧光强度;使用酶联免疫吸附试验检测移植瘤组织中的MMP-9蛋白水平;明胶酶谱检测其活性;使用免疫组织化学方法检测淋巴结转移;使用Kaplan-Meier进行生存分析。结果SW480/control组肿瘤体积大于SW480/CCR7-组(P<0.05);SW480/control组肿瘤组织MMP-9蛋白水平和酶活性明显高于SW480/CCR7-组(P<0.05);SW480/CCR7-组肿瘤淋巴结转移少于SW480/control组(P<0.05);SW480/CCR7-组动物生存期长于SW480/control组(P<0.05)。结论CCR7表达沉默能够抑制结肠癌的MMP-9产生和淋巴结转移。第三部分原代培养人类骨髓间充质干细胞对SW480细胞增殖和侵袭的影响目的原代培养人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)并鉴定;检测间充质干细胞中CCR7的表达;初步探讨人类骨髓间充质于细胞对结肠癌细胞SW480生长和侵袭的影响。方法结合密度梯度离心法和贴壁法原代培养人骨髓间充质干细胞;使用流式细胞分析检测细胞表面分子标志;使用诱导分化试验来鉴定细胞的分化潜能;使用免疫荧光染色和免疫印迹法分析检测细胞的CCR7表达;使用MTT法和Transwell小室检测人类骨髓间充质干细胞对结肠癌细胞SW480生长和侵袭的影响。结果成功培养人骨髓间充质干细胞;其表面分子标志为CD34ˉ、CD45ˉ、CD44+、CD90+;骨髓间充质干细胞能够在条件培养基的作用下向脂肪细胞和成骨细胞分化;骨髓间充质干细胞有CCR7的表达;骨髓间充质干细胞的条件培养基能够刺激SW480的生长(P<0.05);共培养骨髓间充质干细胞和SW480细胞能够刺激肿瘤细胞的侵袭增强(P<0.05)。结论骨髓间充质干细胞表达CCR7蛋白并能够刺激结肠癌SW480细胞增殖和侵袭。第四部分体内研究CCR7介导的人类骨髓间充质干细胞对结肠癌淋巴结转移的影响目的在裸鼠移植瘤模型上研究人类骨髓间充质干细胞对结肠癌淋巴结转移的影响;并探讨CCR7在其中的作用机制。方法按照种植SW480/CCR7ˉ,SW480/control, SW480/CCR7-+hBMSCs和SW480/control+hBMSCs细胞将裸鼠分为SW480/CCR7-, SW480/control, SW480/CCR7-+hBMSCs和SW480/control+hBMSCs组;采用活体荧光成像技术观察裸鼠移植瘤的生长和荧光强度;使用免疫组织化学方法检测淋巴结转移;使用Kaplan-Meier生存曲线进行生存分析。结果SW480/control+hBMSCs组肿瘤大小和淋巴结转移高于SW480/control组(P<0.05);SW480/CCR7-+hBMSCs组肿瘤大小和淋巴结转移高于SW480/CCR7组,生存期则较短(P<0.05)。结论人类骨髓间充质干细胞可以通过CCR7介导刺激结肠癌淋巴结转移。
其他文献
以加强学生工程能力培养为目标,将现有土木工程专业力学实验教学在工程能力培养方面存在的问题提炼为"三个脱节",即实验项目设置与工程需求脱节,实验项目与行业规范脱节,单一
随着苏联的解体和原各加盟共和国的纷纷独立,中亚在全球地缘政治和战略上的重要地位日益凸显。本文在详细分析中、俄、美三国与中亚的利益关系的基础上,论述了三国对中亚所持
针对低碳氮比情况下污水处理系统生物脱氮效果较差的问题,在外加Fe2+情况下,通过监测氨氮、总氮去除率及活性污泥微生物种群分布情况,分析铁离子对低碳氮比SBR污水处理系统生
精益六西格玛是精益思想与六西格玛管理方法的有机结合。本文针对当前事业单位财务管理理念、财务人员队伍建设、财务分析等管理中存在的突出问题,运用精益六西格玛对事业单位
在分析文化意象和文化错位的基础上,以目的论为理论基础,对文化错位的翻译补偿策略进行探讨。结论表明:对于文化意象的翻译,应以最大限度传递原文文化意象为目的,灵活使用翻译显性
随着我国综合国力的增强,人们的生活水平和生活质量都得到了显著提升,现代教育技术的迅猛发展为课堂教学提供了新的契机,成为为课堂注入活力的一大助剂,通过应用现代教育技术
在新时代解放思想,必须以习近平新时代中国特色社会主义思想为统领,坚决破除各种思维定势、工作惯性和路径依赖,在解放思想中统一思想,在学思深悟中把握思想,在改革发展中践
目的 :回顾性研究 30例胸椎间盘突出症的临床表现、诊断及手术治疗效果。方法 :分别对胸椎间盘突出症的临床表现、影像学特征和手术治疗方法进行描述。结果 :后路全椎板切除
企业获得核心竞争能力的关键在于创新,创新是培育核心竞争能力的根本途径。本文基于企业核心竞争能力的讨论,指出了创新对企业核心竞争能力的意义,从创新的六个层面讨论了企