【摘 要】
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脂磷酸磷酸酶(lipid phosphate phosphatase,LPP)是一类重要的脂质水解酶,可催化含磷酸基团的脂质如磷脂酸(phosphatidic acid,PA)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid phosphate,LPA)和二脂酰甘油焦磷酸(diacylglycerol pyrophosphate,DGPP)的去磷酸化反应,分别形成二脂酰甘油(diacylg
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脂磷酸磷酸酶(lipid phosphate phosphatase,LPP)是一类重要的脂质水解酶,可催化含磷酸基团的脂质如磷脂酸(phosphatidic acid,PA)、溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid phosphate,LPA)和二脂酰甘油焦磷酸(diacylglycerol pyrophosphate,DGPP)的去磷酸化反应,分别形成二脂酰甘油(diacylglycerol,DAG)、单脂酰甘油(monoacylglycerol,MAG)和DAG。PA和DAG均是重要的信号分子,同时也是脂质代谢过程的关键中间体。因此,LPP在脂质代谢、逆境胁迫和生长发育过程中具有重要的作用。目前,有关LPP研究大多集中在动物方面,植物LPP的研究相对较少,特别是在作物方面的研究甚少。本研究从甘蓝型油菜(Brassica napus)分离克隆到2个LPP基因,分别命名为LPPα3和LPPβ,通过农杆菌介导的遗传转化将上述两个基因超表达于甘蓝型油菜Westar品种中,获得一批超表达转化株系。表达谱分析结果表明LPPα3在根部和成熟茎秆中表达量较高,LPPβ在幼嫩茎秆中表达量最高。通过在烟草叶片中瞬时表达GFP荧光融合蛋白,结果发现LPPα3和LPPβ均主要定位于内质网。为分析油菜LPPα3是否编码磷脂酸磷酸酶,本研究将其全长c DNA连接在原核表达载体p ET28a,在大肠杆菌细胞中表达LPPα3重组蛋白,分析酶活性和生化特性。结果表明LPPα3可催化PA的去磷酸化而产生DAG,而对LPA、DGPP则未能检测到活性,其最佳活性条件为p H 7.0,且活性不依赖于Mg2+,但受N-乙基马来酰亚胺(N-ethylmaleimide,NEM)所抑制。通过酵母表达油菜全基因组文库筛选LPPα3和LPPβ互作蛋白,结果获得一些与逆境相关的候选互作蛋白,这些数据为后续进一步研究LPPα3和LPPβ的分子调控奠定基础。此外,长链脂酰基辅酶A合成酶(long-chain acyl-coenzyme A synthetase,LACS)催化脂酰基的活化形成脂酰基-Co A,为脂肪酸链的延长和甘油脂质装配和分解代谢中提供代谢前体物。研究表明植物LACS在蜡脂合成中具有重要作用,但LACS是否参与油脂合成代谢过程尚未清楚。本研究主要分析了油菜Bn LACS2、4、8和9对种子油脂积累的影响,结果表明超表达油菜LACS8和LACS9可显著提高种子含油量,而LACS2和LACS4的超表达则不影响含油量,说明不同LACSs在脂质代谢中具有不同的功能。亚细胞定位发现LACS2、4和8主要定位于内质网,表明该类LACSs主要在内质网中参与脂质代谢过程。
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