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干细胞(Stem cell，SC)是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞。近年来干细胞领域的研究为疾病治疗提供了崭新思路，极大的推动了基础医学研究的发展。干细胞多能性维持与定向分化过程涉及特定基因表达的开启与关闭，依赖于复杂而精细的转录调控网络。本文以P19 EC细胞为体系，对干细胞多能性关键基因OCT4在干细胞分化早期的抑制表达机理作了初步探索。 转录辅助抑制因子Grg3(Groucho-related gene3)属于Groucho辅助抑制因子(corepressor)家族，在胚胎发育及器官形成等生理过程中发挥重要作用。以往的研究表明，由于蛋白序列中不具备DNA结合域，转录辅助抑制因子Grg3通常被能结合DNA的转录因子招募至靶基因的调控区域，进而可能通过改变染色质修饰状态以实现转录抑制功能。本文中使用多种手段考察了Grg3参与多能性基因OCT4转录抑制的机制。Grg3表达水平在P19细胞受维甲酸诱导向神经分化的过程中维持不变，通过运用Grg3特异性siRNA以及外源Grg3-V5融合蛋白高表达质粒工具，人们发现P19 EC细胞中OCT4表达水平受到Grg3蛋白水平变化的调节，高水平的Grg3抑制OCT4表达，干扰Grg3则使OCT4表达水平上升。进一步的双荧光素酶报告基因实验以及CHIP实验证实Grg3对OCT4的表达抑制是通过特异性结合在OCT4启动子-3500bp～-3345bp区域来实现的。 转录因子FoxA1(Forkhead box A1)也叫HNF3α，属于叉头蛋白家族(Forkheadfamily)并参与调节众多生理过程。研究表明FoxA1是P19向神经分化早期的关键因子，且在体外已被证明与Grg3存在蛋白-蛋白相互作用，本文中也通过免疫荧光共定位实验在胞内证实了这一点。OCT4启动子-3500bp～-3345bp区域包含2个FoxA1结合位点，双荧光素酶报告基因实验结果表明，这2个位点的点突变将使Grg3对该启动子区域活性的抑制作用消失。因此，FoxA1可能是OCT4转录抑制中招募Grg3的关键因子。