Core binding factor β在缺血性脑损伤中的作用及机制研究

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研究目的:研究CBFB通过异亮氨酸-CBFB-PTEN信号通路在缺血性脑损伤中的作用及机制,并提出了 tDCS的治疗方法。研究方法:将成年雄性Sprague Dawley大鼠大脑中动脉梗塞模型(MCAO)作为脑缺血在体模型,糖氧剥夺(OGD)处理的培养皮层神经元作为脑缺血离体模型。采用免疫印迹法(Western blot)检测脑皮层组织以及神经元内CBFB、PTEN蛋白水平。利用免疫荧光染色检测大脑皮层以及神经元中CBFB的分布及水平。采用TTC染色法检测脑梗死体积,CCK-8比色法、LDH释放实验检测神经元存活率。利用腺病毒转染的方式在培养神经元上过表达、敲低CBFB蛋白水平以及过表达PTEN,并使用了 PTEN抑制剂bpV(pic)、PTEN条件性敲除鼠。最后提出了经颅直流电刺激(tDCS)的治疗电刺激的治疗缺血性脑损伤。结果:大鼠脑缺血损伤以后,补充异亮氨酸增加了脑梗死体积(t=5.513,P<0.05)。OGD损伤后,补充异亮氨酸降低了神经元存活率、增加了 LDH释放率(F=364.6,436.6,P<0.05)。异亮氨酸能下调正常皮层脑组织及培养神经元内CBFB蛋白水平(t=9.545,11.4,P<0.05)。大鼠MCAO处理后,大脑皮层CBFB表达降低;OGD损伤后,神经元内CBFB表达降低(F=126.5,229.7,P<0.05)CBFB荧光降低。在培养神经元上,过表达CBFB降低了 OGD损伤后神经元的死亡;敲低CBFB进一步增加了神经元的死亡(F=117.8,149.1,217.5,158.6,P<0.05)。OGD损伤后,神经元内PTEN表达增加(F=122.6,P<0.05)。在培养神经元上,过表达CBFB降低了 PTEN蛋白水平,敲低CBFB上调了 PTEN蛋白水平(t=8.353,6.309,P<0.05);过表达PTEN以及在PTEN敲除鼠显示PTEN水平对CBFB表达没有影响。在OGD损伤的培养神经元上,过表达CBFB降低了 PTEN的水平,敲低CBFB进一步上调了 PTEN蛋白水平(F=187.9,P<0.05)。在OGD损伤的培养神经元上,异亮氨酸处理进一步降低了CBFB 蛋白水平;进一步上调了 PTEN 蛋白水平(F=95.15,262.7,P<0.05);bpV(pic)处理降低了异亮氨酸所增加的神经元死亡(F=144.5,339,P<0.05)。大鼠MCAO处理后,tDCS治疗使脑梗死体积降低,大脑皮层CBFB表达增加(t=7.505,4.581,P<0.05)。结论:脑缺血损伤后,异亮氨酸通过CBFB-PTEN信号通路加重了损伤。tDCS治疗通过上调CBFB减轻损伤。
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