叶酸受体是一种在肿瘤细胞表面过表达的蛋白，通过叶酸及其受体的特异结合，而介导胞吞作用，被应用来传递药物活性分子。本研究中，以配体-受体的特异结合为基础，制备了键合叶酸、键合紫杉醇的胶束，经过筛选及校正，依据最合理配比，由两种混合胶束组成新的纳米微粒，而在组装后，复合胶束的叶酸质量比含量1.4%，而同时，紫杉醇（PTX）胶束中PTX活性药物质量比含量25%，然后，将两胶束以质量比1:9的比例，应用相应程序，制备成混合胶束从而同时载有叶酸和PTX。根据本实验室此前研究，证实混合胶束的水溶性良好，动态光散射（DLS）及扫描电镜（TEM）证实，在水媒介中形成特殊的外壳-内核形态的分散的微粒，而将活性药物PTX―包裹‖并保护在聚合物组成的外壳内，以避免/减少PTX在给药后血液循环中的非特异（到达靶区之产胆）释放或非治疗目的相关的释放，因此理论上可以减少毒副作用，同时达到治疗效果。具备有聚合物/纳米微粒、而以EPR效应为基础的―被动靶向‖（EPR）效应，与通过叶酸配体介导的以配体-受体的特异相结合，而形成的主动靶向效应。本实验以动物源性肝癌细胞H22等的体外检测，以及小鼠BALB/c的体内荷瘤抑制、生存分析等实验来评价这一种混合胶束FA-M(PTX)的抗肿瘤疗效是否存在优势。在本项目研究中，叶酸（folate, FA）作为靶向基元，键合在胶束的侧链上，从而可构建出相应载药聚合物。同时，PTX键合在另一种聚合物的载体上面（M(PTX)）。这样把两种聚合物特异地制备后，构成了同时载有FA及PTX的混合胶束微粒（FA-M(PTX)），通过自组装作用，形成载药的外壳-内核结构，这样的复合纳米微粒有着良好的理化特点，比如说水溶性增加，以及在血液循环中的代谢时间可延长，还有其生物可降解性，最重要的一点是，FR-FA介导的胞吞靶向作用以及细胞摄取增加。本实验的结果见下：1.体外进行细胞实验(in vitro)1.1应用不同剂型的药物PTX, M(PTX)和FA-M(PTX)分别作用12,24和48h后，H22细胞存活率与紫杉醇当量的浓度梯度相关。1.2作用24h和72h后，药物组凋亡率较空白对照组显著增加；不同剂型药物PTX,M(PTX)和FA-M(PTX)作用24h后H22细胞凋亡率分别为16.8%,8.8%和11%，而在作用72h后，不同剂型药物相应的细胞凋亡纺分别为39.4%,34.9%和37.7%。1.3肿瘤细胞对载有叶酸的复合胶束的摄取较正常细胞显著增加(Hela细胞摄取阳性率62.1%；H22细胞摄取阳性率55.4%而BEAS-2B细胞为37.6%)。此外，肿瘤细胞对无叶酸胶束的摄取较正常细胞增加（Hela为41.8%，H22为40.1%而BEAS-2B为36.5%）；对实验数据进行统计分析提示，与BEAS-2B细胞比较，Hela和H22这两种类型的肿瘤细胞对载有叶酸的复合胶束的摄取增加(p<0.001和p=0.017)；而且，Hela和H22细胞对载有叶酸的复合胶束的摄取较其对无叶酸胶束的摄取增加(p<0.001)；同时，Hela细胞对载有叶酸的复合胶束的摄取较H22增加(P=0.036)，这种现象可能解释为叶酸-叶酸受体介导的胞吞效应。2.体内实验2.1肿瘤转移点的密度在药物治疗组明确低于对照组；荷瘤小鼠的肺组织重量与小鼠体重的比值表示肿瘤转移负担指数，治疗组明显低于对照组(p<0.05)，并呈剂量相关性。2.2在PTX给药当量为15mg/kg或30mg/kg时，HE染色显示的肺转移抑制率在不同的治疗组中呈现以下趋势：PTX <M(PTX)<FA-M(PTX)；此外，呈现出剂量依赖的治疗效应。FA-M(PTX)组的MMP-9表达灰度值大于其它药物治疗组，其中M(PTX)和FA-M(PTX)组之间无统计学差异；综上所述，MMP-2和MMP-9的表达在药物治疗组下调，而FA-M(PTX)对MMP-2和MMP-9表达的抑制效应最强，这反映了FA-M(PTX)较PTX和M(PTX)是更优的治疗肝癌肺转移的药物。.2.3生存分析：Kaplan-Meier生存曲线；荷瘤小鼠的中位生存时间以及平均生存时间的差异进行log-rank检验；PTX当量为15mg/kg或者30mg/kg时，药物治疗组的小鼠生存期较空白对照组延长，其中，FA-M(PTX)较PTX和M(PTX)对H22肺转移模型的疗效更优，更大程度地延长了荷瘤小鼠模型的存活时间。