Calcineurin抑制剂对种植体骨整合的影响和机制研究

来源 :复旦大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:fkj1022
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第一章Calcineurin抑制剂对SD大鼠上颌牙槽骨来源的成骨细胞的生物学影响目的:研究他克莫司和环孢素A对SD大鼠上颌牙槽骨来源的成骨细胞增殖、分化和矿化的影响。材料和方法:取6周龄Sprague-Dowley大鼠的上颌牙槽骨组织培养成骨细胞。传代后Gimsa染色、ALP染色、茜素红染色鉴定成骨细胞。传代稳定后分组:低浓度他克莫司组(TAC-LOW)、高浓度他克莫司组(TAC-HIGH)、环孢素A组(CYSA)、对照组(Untreated)。各组给与相应剂量的药物。MMT法检测各组细胞增殖情况。qRT-PCR反应测定加药培养第1周末和第3周末的BGP、Ⅰ型胶原、c-fos、c-jun的mRNA相对表达量。第7天、第10天和第14天检测细胞培养液ALP和钙离子浓度。培养28d时用茜素红染色法检测矿化结节形成情况。结果:CYSA组和TAC-HIGH组成骨细胞的第10天和第14天的ALP水平下降,钙离子浓度上升。TAC-LOW组成骨细胞第14天的ALP水平明显上升,钙离子浓度下降。第28天TAC-LOW组钙化结节形成和对照组无明显差异。TAC-HIGH组钙化结节形成较少。TAC-LOW组的c-fcs、c-jun、BGP和Col-I mRNA第3周明显表达增强,TAC-HIGH组和CYSA组的上述基因表达明显降低。结论:较低浓度的他克莫司促进成骨细胞增殖、分化和矿化。较高浓度的他克莫司早期促进成骨细胞的增殖,但抑制分化和矿化功能。环孢素抑制成骨细胞的增殖、分化和矿化。第二章他克莫司对SD大鼠骨密度、骨微结构、骨代谢的影响目的:研究不同浓度的他克莫司对SD大鼠的骨密度、骨微结钩和骨代谢的影响。材料和方法:30只6周龄Sprague-Dawley大鼠,雌雄各半,随机分为低浓度他克莫司组(TAC-LOW)、高浓度他克莫司组(TAC-HIGH)、生理盐水对照组(NS)。各组注射相应剂量的药物。在用药后每15天(第1天、第16天、第31天、第46天、第61天、第76天、第91天)抽血检测血清骨形成指标ALP、BGP和骨吸收指标Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)、可溶性RANKL水平。第3个月处死动物取胫骨标本和上颌牙槽骨标本,DXA检测胫骨近端、上颌牙槽骨的骨密度。microCT检测骨微结构的形态计量学参数。结果:TAC-LOW组胫骨近端骨密度降低,但上颌牙槽骨骨密度没有明显变化,ALP和BGP升高,NTX和RANKL升高,骨小梁数量增加,骨小梁厚度降低,矿化沉积率升高。TAC-HIGH组胫骨近端骨密度和上颌牙槽骨骨密度降低,ALP和BGP水平降低,NTX和可溶性RANKL水平升高,骨小梁厚度降低,连续性增加,矿化沉积率降低,骨吸收表面增加。结论:低浓度他克莫司同时促进骨形成和骨吸收,胫骨近端和上颌牙槽骨骨密度基本没有变化。应力区胫骨近端骨量下降,上颌牙槽骨骨质下降不明显,但骨小梁的结点、末端和空隙有变化。高浓度他克莫司早期可促进骨形成,但很快促进骨吸收代谢,导致骨密度下降。第三章他克莫司作用下对Beagle’s犬的钛种植体骨整合的影响目的:观察和评价不同浓度他克莫司作用下Beagle’s犬的钛种植体-骨整合界面。材料和方法:6只Beagle犬分为3组:低浓度他克莫司组(TAC-LOW)、高浓度他克莫司组(TAC-HIGH)、生理盐水对照组(NS)。注射相应剂量的药物。2个月后植入钛种植体。应用共振频率分析仪测定种植体稳定度。饲养3个月后处死动物,取种植体及周围骨组织标本,microCT检查种植体骨整合界面。硬组织切片后甲苯氨蓝染色、HA染色和扫描电镜观察种植体骨整合界面,并进行元素分析。结果:TAC-LOW组种植体稳定度和对照组相比没有明显差异。光学显微镜观察种植体周围骨组织形态正常。元素分析显示骨组织内钛含量较高。TAC-HIGH组种植体稳定度明显降低,伤口愈合不良,EDS和SEM分析显示骨组织内钛含量较少,而碳、氧元素含量较高。结论:较低浓度他克莫司作用下,能够建立稳定度和对照组无明显差异的钛种植体骨整合。较高浓度的他克莫司作用下,钛种植体的骨整合没有成功。第四部分应用他克莫司的器官移植患者行种植牙治疗的病例系列研究目的:探索在病情稳定的Calcineurin抑制剂应用者人群中进行种植牙治疗的可行性方法:13名使用他克莫司或环孢素A作为免疫抑制剂的肝移植患者进行种植牙治疗。观察期为1-3年。通过影像学检查评估种植术后3个月和其后每年的种植体周围区骨吸收(MBL)(每一枚种植体的近中和远中)。每个种植体的近中、远中、颊侧、舌/腭侧探诊深度(PD)。使用Periotest测量仪测定种植体稳定度。结果:3年来,所有种植体没有发生松动和脱落。除了3个患者口腔内其他牙松动外,患者对种植牙治疗的效果均表示满意。结论:应用治疗浓度他克莫司的器官移植患者能够安全有效地使用种植体修复缺牙。
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