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目的:研究高效、特异、简便的肿瘤主动免疫治疗方法,同时活化CD8~+CTL和CD4~+Th淋巴细胞增强机体的抗肿瘤免疫,达到清除手术后残余肿瘤细胞的目的,探索恶性肿瘤综合治疗的新方法。 方法:用在BALB/c小鼠容易成瘤的MM45T.Li细胞系(小鼠肝癌细胞系)接种同源小鼠,建立肿瘤模型。通过RT-PCR方法体外合成MHC-ⅡcDNA,以复制缺陷型重组腺病毒载体介导将MHC-Ⅱ 基因导入肿瘤细胞,采用理化方法抽提肿瘤蛋白,物理吸附于灭活的肿瘤细胞表面,制备全细胞肿瘤疫苗。用制备的疫苗对实验小鼠预防接种并在小鼠转移性肿瘤模型上进行实验,实验小鼠分成3 组。1.预防组:先用疫苗免疫后再接种肿瘤细胞;2.治疗组:先接种肿瘤细胞,待成瘤后(模拟转移性肿瘤)再接种疫苗:3.对照组:与治疗组同时接种肿瘤细胞,但不做任何处理。肿瘤生长的观察:有无肿瘤生长、肿瘤生长速度等。同时采用MTT 比色法检测疫苗蛋白刺激免疫小鼠 T细胞增殖能力、Dot BIot 法检测免疫小鼠血清中有无抗疫苗蛋白特异性抗体产生,验证疫苗对易感宿主的保护作用以及对已形成的转移性肿瘤的治疗作用。 结果:在对照组小鼠,肿瘤细胞接种后12天左右,接种点全部有肿瘤结节形成,生长速度快,在接种后第8周前后有2只小鼠因肿瘤生长而死亡。治疗组小鼠与对照组小鼠同时成瘤,但经疫苗接种后4-8 周肿瘤结节直径增长较对照组显著减慢。在预防组小鼠中,即使接种的细胞数量远远超过肿瘤形成所需细胞数,经长期观察也无肿瘤结节形成。MTT法检测发现肿瘤蛋白能体外刺激预防组小鼠T细胞增殖。Dot Blot法检测见预防组小鼠血清与肿瘤蛋白间有较强的抗原-抗体反应,治疗组小鼠血清与肿瘤蛋白间也似乎存在抗原-抗体反应,而对照组无阳性发现。 结论:表达 MH-Ⅱ分子的肿瘤细胞吸附肿瘤蛋白抗原制备的肿瘤疫 — ————— 苗能增加暴露于兔疫系统的抗原数量和抗原提呈,同时活化CD41h 和 CDS℃TL细胞,增强机体的抗肿瘤细胞免疫及体液免疫功能。免疫接种后 对易感宿主有很好的保护作用,并能使某些已经形成的转移性肿瘤生长 速度延缓,延长平均生存时间。对疫苗加以改进以应用于人类转移性肿 瘤的治疗,将成为一种特异性高、疗效好的治疗手段得到广泛应用。