环丙沙星高/低累积菜心内生细菌生物多样性研究

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目前抗生素已经成为一种环境中新型的重要有机污染物,抗生素对环境的污染行为越来越受到各学术界的重视。在抗生素应用中,环丙沙星由于其抗菌谱广、抗菌活性强、不良反应少,其应用几乎覆盖了人类、兽用及医学的各个方面。由于环丙沙星的大量使用导致耐药菌株也日益增多,应用受到了极大的限制。基于本课题组已筛选出对环丙沙星具有高/低累积效应的不同基因型菜心品种,但其机理尚未明确。因此,本研究拟通过室内盆栽模拟实验,对不同基因型环丙沙星高/低累积菜心内生细菌的多样性进行系统研究,分离出环丙沙星高/低累积菜心内生细菌,探明其多样性差异,从微生态学的角度评估高/低累积环丙沙星菜心内生细菌的生物多样性,并通过药敏试验,筛选出环丙沙星的高抗菌株,为筛选环丙沙星高效降解菌提供参考,并为环丙沙星的生物降解提供应用基础和理论。本论文针对环丙沙星高/低累积菜心内生细菌进行研究,其研究成果如下:1.分离共获得纯化的内生细菌141株,其中从环丙沙星高累积菜心油青四九中分离得到73株内生细菌,其中根部47株,茎部7株,叶部19株;环丙沙星低累积菜心油绿粗苔中分离得到68株内生细菌,其中根部60株,茎部7株,叶部1株。菜心内生细菌的分布量与其生长环境关系密切,菜心不同组织器官中内生细菌分布量不同,油青四九菜心中内生细菌的分布主要集中在根部,其次是叶部,最后是茎部;油绿粗苔菜心中内生细菌的分布主要集中在根部,其次是茎部,最后是叶部。同一种菜心不同器官中内生细菌的分离频率不同,不同菜心的同一器官中内生细菌的分离频率也不相同,根部均为不同基因型菜心中内生细菌主要定殖地。2.在环丙沙星高累积菜心油青四九中,各组织器官(根、茎、叶)的菌株主要以革兰氏阴性菌为主,从茎部分离纯化出的7株菌株均为革兰氏阴性菌;其中革兰氏阴性菌在油青四九菜心中各个部位的分离频率大小为根部>叶部>茎部;菌体形态主要以杆菌为主,茎部的7株菌株100%为杆菌;其中杆菌在油青四九菜心各部位中的分布情况为根部>叶部>茎部。在环丙沙星低累积菜心油绿粗苔中,各组织器官(根、茎、叶)中菌株主要以革兰氏阴性菌为主;革兰氏阴性菌在油绿粗苔菜心中各个组织器官中的分离频率为根部>茎部>叶部;根部和叶部的菌株均以杆菌为主,茎部的菌株以球菌为主;其中杆菌在油绿粗苔菜心各组织器官中的分离频率为根部>茎部>叶部。除了环丙沙星低累积菜心油绿粗苔茎部中的菌株以球菌为主外,两种不同基因型菜心中各个部位的菌株均以杆菌为主;两种不同基因型菜心中不同部位的革兰氏阴性菌和杆菌的分布情况基本一致。3.药敏试验结果表明:抗药的内生细菌所占菌株总数的1.42%,中介的内生细菌所占菌株总数的3.55%,而敏感的内生细菌所占菌株总数的95.03%;其中高累积菜心中分离得到2株高抗菌,低累积菜心中未分离得到高抗菌株。两种不同基因型菜心中的内生细菌的耐药情况存在着差异,同一菜心中不同部位之间的内生细菌的耐药情况也存在着一定的差异。根据现代“内共生”理论,初步推断,耐药菌株的存在和分布与高低累积环丙沙星存在一定的相关性,但其相关强度和作用机理尚待进一步研究。4.环丙沙星高抗菌株的分子生物学鉴定结果为假单胞菌属、肠杆菌属、类芽孢杆菌属、芽孢杆菌属、无色杆菌属。
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