细菌或病毒DNA能够激活宿主的免疫系统，引起先天性或获得性免疫反应，其结构基础为以非甲基化CpG二核苷酸为核心的短核苷酸序列。CpGODN是人工合成的含CpG基序的寡核苷酸(CpGoligodeoxynucleotides)，能够模拟细菌DNA的免疫刺激活性，直接激活B细胞、树突状细胞、巨噬细胞、抗原递呈细胞等，间接激活T细胞、NK细胞，诱导Th1型免疫应答。CpGODN通过激活免疫系统，使机体获得对细菌、病毒、和原虫等多种病原体感染的保护性免疫。但CpGODN用于体外抗肿瘤作用的研究较少。本研究拟探讨CpGODN体外刺激人外周血单个核细胞(PBMC)后对肿瘤细胞的杀伤效应，为肿瘤的免疫治疗提供新的思路和方法。实验内容和结果如下： 第一部分CpGODN活化的外周血单个核细胞体外杀肿瘤细胞效应 目的：研究CpGODN活化的人外周血单个核细胞(PBMC)对肿瘤细胞的杀伤效应。 方法：实验分3组，空白对照组：PBMC+PBS；ODN2243组：PBMC+ODN2243；ODN2216组：PBMC+ODN2216。CpGODN体外刺激PBMC，将CpGODN介导活化的PBMC与肿瘤细胞按50∶1的比例共孵育72h后，以MTT方法检测各组PBMC对肿瘤细胞的杀伤率；收集细胞上清，检测其中谷氨酸丙酮酸转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)含量，间接判断各组PBMC对肿瘤细胞的杀伤作用；用显微镜观察CpGODN活化的PBMC对肿瘤细胞杀伤后，肿瘤细胞形态学的改变。 结果：经ODN2216活化的PBMC对四株肿瘤细胞的杀伤活性均明显高于与相应空白对照组和ODN2243组(P＜0.05)，而后两组肿瘤细胞杀伤率无统计学差异；对不同的肿瘤细胞的杀伤效率也不同，对HepG2杀伤作用最强，对5-8F杀伤作用较弱；三组对正常人肝细胞株QSG7701均有一定的杀伤作用，但无统计学差异；ODN活化的PBMC与靶细胞共孵育72h后，上清中均可检测到LDH，但只在HepG2和QSG7701上清中检测到ALT；ODN2216组肿瘤细胞培养上清中LDH含量和ODN2216组HepG2上清中ALT含量明显高于ODN2243组和空白对照组(P＜0.05和P＜0.01)，而后两组上清中LDH和ALT含量无统计学差异；正常人肝细胞株QSG7701细胞培养上清中ALT和LDH的含量在三组之间无明显统计学差异；ODN2216激活的PBMC组对肿瘤细胞的破坏较静息状态PBMC组和ODN2243刺激的PBMC组明显增多，而对正常人肝细胞株QSG7701的破坏在三组间无明显差异。 结论：CpGODN2216能有效激活PBMC，发挥对肿瘤细胞的杀伤作用，但对正常细胞作用不明显；CpGODN2243对PBMC无明显激活作用。 第二部分CpGODN体外刺激正常人PBMC后对TRAILmRNA表达的影响 目的：研究CpGODN活化的人外周血单个核细胞(PBMC)TRAILmRNA表达水平的变化。 方法：实验分3组，空白对照组：PBMC+PBS；ODN2243组：PBMC+ODN2243；ODN2216组：PBMC+ODN2216。CpGODN体外刺激PBMC，48h后，用RT-PCR方法检测3组PBMC的TRAILmRNA表达水平。 结果：静息状态的PBMC不表达或仅微量表达TRAILmRNA，用ODN2243刺激PBMC48h后表达水平无明上调；但用ODN2216刺激48h后PBMC的TRAILmRNA表达含量明显提高。 结论：静息状态的PBMC不表达或仅微量表达TRAILmRNA，但经CpGODN2216激活后，TRAILmRNA表达含量明显上调。