论文部分内容阅读
目的观察地奥心血康对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠TLR4/My D88/NF-κB信号通路的影响,探讨其抗AS的作用机制。方法选取雄性SD大鼠,适应性饲养1周后随机分为正常对照组,模型组,阿托伐他汀组(2.0 mg·kg-1),地奥心血康高剂量组(100 mg·kg-1)、中剂量组(30 mg·kg-1)、低剂量组(10 mg·kg-1),每组10只。正常组喂食普通饲料,其余各组给予高脂饲料并在实验开始时一次性腹腔注射维生素D2（Vitamin D2,VD2）6.0×105IU·kg-1,实验第3,6,9周再分别注射VD21.0×105IU·kg-1。第10周起灌胃给药,连续8周。观察大鼠一般状态;检测血清总胆固醇（Total cholesterol,TC）、甘油三酯（Triglyceride,TG）、低密度脂蛋白胆固醇（Low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（High density lipoprotein cholesterol,HDL-C）水平;计算大鼠心脏系数和AS指数（Atherosclerosis index,AI）;酶联免疫吸附（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）法检测血清肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α）,白介素-6（Interleukin-6,IL-6）,白介素-1β（Interleukin-1β,IL-1β）水平;苏丹IV染色法观察主动脉AS斑块病变程度及分布范围;苏木精伊红染色法（Hematoxylin-eosin staining,HE）观察主动脉病理形态的改变;Masson染色法观察主动脉窦部的胶原纤维表达含量;实时荧光定量聚合酶链反应（Real time quantitative-polymerase chain reaction,RT-q PCR）和蛋白免疫印迹（Western blot,WB）法检测主动脉组织TLR4,My D88,NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达。结果1.大鼠一般状态:正常对照组大鼠皮毛光泽,精神良好,饮食、尿量、体重增加平稳。模型组大鼠皮毛光泽暗淡,颜色枯黄,日常活动明显减少,精神萎靡,困倦嗜睡,饮食和饮水量减少,体重明显减轻;给药组大鼠皮毛逐渐恢复光泽,体重有不同程度的增加,情况有所改善。2.地奥心血康对大鼠血脂水平的影响:与正常对照组比较,模型组血清TC,TG,LDL-C水平显著升高（P<0.01）,HDL-C水平显著下降（P<0.05）;与模型组比较,地奥心血康高、中剂量组和阿托伐他汀组血清TC,TG,LDL-C含量显著降低（P<0.05或P<0.01）,HDL-C含量显著升高（P<0.01）。3.地奥心血康对大鼠心脏系数和AI的影响:与正常组比较,模型组大鼠心脏系数和AI显著高于正常组（P<0.01）;与模型组比较,地奥心血康各剂量组和阿托伐他汀组均不同程度降低心脏系数和AI（P<0.05,P<0.01）。4.地奥心血康对大鼠主动脉病变的影响:苏丹IV染色,正常对照组大鼠主动脉内膜比较光滑、干净;模型组主动脉内膜含有数量不一的红色斑块（脂滴）,斑块面积与主动脉内膜总面积比值显著增加（P<0.01）;与模型组比较,地奥心血康各剂量组和阿托伐他汀组主动脉内膜的斑块大小及数量相对减少,斑块面积与主动脉内膜总面积比值明显下降（P<0.05或P<0.01）。主动脉HE染色,正常对照组大鼠主动脉形态正常,血管内皮连续完整光滑,血管平滑肌细胞排列规则整齐;模型组大鼠主动脉内膜增厚,内皮不连续,平滑肌细胞明显增殖、排列紊乱,大量泡沫细胞聚集;地奥心血康各剂量组和阿托伐他汀组主动脉病理改变明显减轻。主动脉窦Masson染色,模型组大鼠主动脉窦部胶原纤维含量明显增加,胶原纤维面积与动脉管腔总面积的比值明显升高（P<0.01）;与模型组相比,地奥心血康各剂量组和阿托伐他汀组胶原纤维含量不同程度减少,胶原纤维面积与动脉管腔总面积的比值下降（P<0.05或P<0.01）。5.地奥心血康对大鼠血清TNF-α,IL-1β,IL-6水平的影响:与正常对照组比较,模型组血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高（P<0.01）;与模型组比较,地奥心血康中、高剂量组和阿托伐他汀组TNF-α,IL-1β,IL-6含量显著降低（P<0.01）,地奥心血康低剂量组TNF-α含量降低（P<0.01）。6.地奥心血康对大鼠主动脉TLR4,My D88,NF-κBp65 mRNA和蛋白表达的影响:与正常对照组比较,模型组大鼠主动脉TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,地奥心血康各剂量组和阿伐他汀组大鼠主动脉TLR4、My D88、NF-κB p65 mRNA基因表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。与正常对照组比较,模型组大鼠主动脉TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达水平明显升高（P<0.01）;与模型组比较,地奥心血康各剂量组和阿伐他汀组大鼠主动脉TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。结论地奥心血康对大鼠动脉粥样硬化具有防治作用,其作用机制之一可能是通过调控TLR4/My D88/NF-κB信号转导,减轻炎症反应,抑制动脉粥样硬化进程。