【摘 要】
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目的:研究BEL-7404肝癌细胞ECEL1基因敲减对CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表达的影响,探讨敲减ECEL1基因后抑制肝癌细胞的增殖、促进其凋亡的机制,为肝癌防治提供新的靶点。
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目的:研究BEL-7404肝癌细胞ECEL1基因敲减对CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表达的影响,探讨敲减ECEL1基因后抑制肝癌细胞的增殖、促进其凋亡的机制,为肝癌防治提供新的靶点。方法:实验分为实验组(shECEL1组)和对照组(sh Ctrl组),应用ECEL1基因的慢病毒载体体外感染人肝癌细胞BEL-7404,通过荧光显微镜检测感染效率;然后提取两组细胞总RNA,通过qPCR检测敲减ECEL1前后BEL-7404细胞ECEL1 mRNA的表达情况;最后通过qPCR分别检测ECEL1基因敲减后人肝癌细胞BEL-7404 CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表达情况。结果:(1)两组人肝癌细胞BEL-7404慢病毒感染情况:shECEL1组和shCtrl组细胞均可见绿色荧光,计算两组感染效率在80%以上,慢病毒载体感染成功。(2)感染后两组人肝癌细胞BEL-7404 ECEL1 m RNA表达情况:shECEL1组与shCtrl组相比,ECEL1 mRNA的表达受到抑制,表达水平显著降低(P<0.01)敲减效率达到70.5%。成功构建稳定的ECEL1基因敲减的人肝癌细胞。(3)感染后两组人肝癌细胞BEL-7404中ECEL1基因敲减后CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表达情况:人肝癌细胞BEL-7404的shECEL1组中CDH1和MAP3K1 mRNA表达与sh Ctrl组相比增加,而EGR1mRNA表达与sh Ctrl组相比减少,统计学处理均有显著意义(<0.01),FOSL1mRNA表达与shCtrl组相比减少,但无统计学差异(>0.05)。结论:敲减ECEL1基因可增强人肝癌细胞BEL-7404中CDH1、MAP3K1基因的表达,下调EGR1及FOSL1基因的表达,ECEL1可能通过上述途径调控肝癌细胞的增殖、凋亡。
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