A型单端孢霉烯族毒素（Trichothecenes,TS）是自然存在于自然界中的一类重要的真菌毒素,主要是由镰刀菌（Fusarium）所产生的一类次级代谢产物。A型TS可广泛地污染粮食作物,尤其是大麦、燕麦、小麦、花生、马铃薯和玉米等农作物及其产品。这类毒素可以通过污染饲料,在动物和动物源性食品内残留,对人类和动物健康形成严重危害。A型TS可以诱发动物和人产生一系列的毒性反应,包括食欲下降和呕吐,生长迟缓、免疫低下、神经紊乱和内分泌紊乱等。尤其是此类毒素引起的拒食反应,是食源性中毒最直接的表现,虽然已有部分试验表明了 T-2毒素可以诱导拒食反应,但是,A型TS在同一物种中引起拒食反应的强度、剂量以及机理尚不清楚。在自然界中,A型TS主要包含4种:（1）T-2毒素（T-2 toxin,T-2）;（2）HT-2毒素（HT-2 toxin,HT-2）;（3）蛇形毒素（Diacetoxyscirpenol,DAS）;（4）新茄镰孢菌醇（Neosolaniol,NEO）。本试验以T-2、HT-2、DAS和NEO这4种毒素为对象,以已建立的小鼠急性拒食模型为基础,通过灌胃（Oral Gavage）和腹腔注射（Intraperitoneal Injection,IP）两种攻毒方式,对比研究了 4种毒素诱导拒食反应的量效关系和拒食的持续时间,获得了 A型TS引起拒食反应的最大无作用剂量（No observed adverse effect,NOAEL）和最小有作用剂量（Lowest observed adverse effect,LOAEL）,通过LOAEL对4种A型TS的毒性强度进行排序;从调控食欲相关的4种饱感激素:胆囊收缩素（Cholecystokinin,CCK）、胰高血糖素样肽-1（Glucagon-like peptide-1,GLP-1）、糖依赖性胰样多肽（Glucose dependent insulinotropic polypeptide,GIP）、酪酪肽（Peptide YY3-36,PYY3-36）入手,通过酶联免疫吸附试验（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）分析血浆中饱感激素与A型TS诱导拒食反应的关系;同样地方法分析血浆中调控食欲相关的神经递质:5-羟色胺（Serotonin,5-HT）和P物质（Substance P,SP）与A型TS诱导拒食反应的关系;通过实时聚合酶链式反应（Real-Time Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）分析肝脏和脾脏中的细胞因子:白介素 1-β（Interleukin-1 β,IL-1β）、白介素-6（Interleukin-6,IL-6）、肿瘤坏死因子-α（Tumour necrosis factor-α,TNF-α）与 A 型 TS 诱导拒食反应的关系。试验I A型TS诱导拒食反应的比较研究本试验以已建立的小鼠建立的急性拒食反应模型为基础,采用灌胃和IP两种方式对小鼠攻毒T-2、HT-2、DAS 和 NEO,攻毒剂量为 0、0.01、0.1、0.5、1 mg·kg-1·bw,攻毒之后在以下时间点0.5、1、2、3、6、16、24、48、72、96 h测定小鼠采食量。应用统计学方法分析得到4种毒素诱导拒食反应的NOAEL和LOAEL以及引起拒食反应的量效关系、持续时间和耐受性,比较两种攻毒方式下4种毒素诱导拒食反应的能力。结果表明:4种毒素T-2、HT-2、DAS和NEO均可以诱导拒食反应,拒食反应发生非常迅速,均可在0.5 h内发生,持续时间为6-96 h不等,并且具有明显的剂量依赖性。灌胃攻毒后,T-2、HT-2、DAS和NEO的NOAEL分别为0.01、0.01、0.1和 0.01 mg·kg-1·bw,LOAEL 分别为 0.1、0.1、0.5 和 0.1mg·kg-1·bw;IP 攻毒后,T-2、HT-2、DAS 和 NEO 的 NOAEL 分别为 0.01、0.01、<0.01、0.01 mg·kg-1·bw,LOAEL分别为0.1,0.1,0.01和0.1 mg·kg-1·bw。参照毒素诱导拒食反应的NOAEL和LOAEL,4种毒素诱导急性拒食反应的毒性顺序为T-2 ≈ HT-2=NEO>DAS（oral gavage）;DAS>T-2≈HT-2≈NEO（IP）。试验IIA型TS诱导拒食反应与胃肠道饱感激素的关系本试验以小鼠急性拒食模型为基础,通过灌胃和IP对小鼠攻毒T-2、HT-2、DAS和NEO,攻毒剂量为1 mg·kg-1·bw,在攻毒后的0、0.5、2、6和24h采集小鼠血液。采用直接竞争ELISA方法测定小鼠血浆中饱感激素CCK、GLP-1、GIP和PYY3-36的浓度,分析4种毒素攻毒后血浆中饱感激素的浓度变化。T-2、HT-2、DAS和NEO灌胃攻毒后1)血浆CCK浓度最高点分别出现在6 h、6 h、2 h、2 h,持续时间分别为24h、24h、>6h、>6h;2)与CCK相比,GLP-1的变化相对较弱,浓度最高点分别为2h、2h、6h、6h,持续时间分别为6h、6h、>6h、>6h;3)血浆PYY3-36浓度最高点均出现在2h,持续时间分别为>6h、6h、6h、6h;4)血浆GIP浓度最高点均出现在2 h,持续时间分别为24 h、24 h、6 h、>6 h。T-2、HT-2、DAS和NEO IP攻毒后1)血浆CCK浓度最高点均出现在6 h,持续时间均>24 h;2)血浆GLP-1浓度最高点均出现在2h,持续时间均为6h;3)血浆PYY3-36浓度最高点6h、2h、2 h、2 h,持续时间分别为24 h、>6 h、2 h、2 h;4)血浆GIP浓度最高点分别为2 h、2 h、0.5 h、0.5 h,持续时间分别为 24 h、24 h、6 h、24 h。说明T-2、HT-2、DAS 和NEO攻毒小鼠后血浆中饱感激素的浓度显著上升,且上升的趋势与4种毒素诱导的拒食反应呈正相关,说明这4种饱感激素在A型TS引起的拒食反应中发挥着重要作用。试验Ⅲ A型TS诱导拒食反应与神经递质的关系本试验设计与试验Ⅱ的设计相一致。采用直接竞争ELISA方法检测小鼠血浆中神经递质SP和5-HT的含量,分析4种毒素T-2、HT-2、DAS和NEO攻毒后血浆中神经递质的浓度变化。T2、HT-2、DAS和NEO灌胃攻毒后1)血浆5-HT浓度最高点均出现在2h,持续时间分别为24h、24h、6h、6h;2)血浆SP浓度最高点同样均出现在2h,持续时间均为6h。T-2、HT-2、DAS和NEO IP攻毒后1)血浆5-HT浓度最高点分别为6h、6h、2h、2h,持续时间分别为24h、24h、6h、6h;2)血浆SP浓度最高点分别出现在2h、6h、2h、2h,持续时间分别为24h、24h、6h、6h。试验结果显示T-2、HT-2、DAS和NEO攻毒小鼠后血浆中神经递质的浓度明显上升,且上升的趋势与4种毒素诱导的拒食反应呈正相关,说明神经递质5-HT和SP在A型TS诱导的拒食反应中发挥着重要作用。试验Ⅳ A型TS诱导拒食反应与细胞因子的关系本试验以试验Ⅰ为基础,选取1 mg·kg-1·bw T-2、HT-2、DAS和NEO对小鼠进行灌胃和IP攻毒,并在攻毒后0 h、2h、6 h和24 h后采集小鼠肝脏和脾脏。采用RT-PCR检测技术检测4种毒素攻毒后小鼠肝脏和脾脏中细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。结果表明:T-2、HT-2、DAS和NEO均可上调肝脏和脾脏中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平,且基因的上调趋势与T-2、HT-2、DAS和NEO诱导的拒食反应相一致。说明细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α在A型TS诱导的急性拒食反应中发挥作用。本试验首次在同一物种中采用两种攻毒方式对4种A型TS T-2、HT-2、DAS和NEO诱导的急性拒食反应的强度进行比较,制定了T-2、HT-2、DAS和NEO诱导急性拒食反应的LOAEL和NOAEL,并将其毒性顺序进行排序。从调控食欲相关的三条途径入手,发现饱感激素、神经递质以及细胞因子在T-2、HT-2、DAS和NEO诱导拒食反应中的变化,阐明了 A型TS诱导拒食的部分机理。本试验使人们对A型TS的毒性有了进一步的认识,为今后制定T-2、HT-2、DAS和NEO的安全限量提供理论依据,为防治其毒害作用奠定科学基础。