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红三叶草(Trifolium Pratense.L)为豆科三叶草属多年生牧草，含有丰富的异黄酮类化合物，其中芒柄花黄素和鸡豆黄素含量相对较高。红三叶草异黄酮具有消炎、抗癌、抗肿瘤、调节人体激素平衡等多种生理作用。芒柄花黄素和鸡豆黄素还是制备大豆异黄酮苷元的重要原料。本试验以红三叶草为原料，研究了红三叶草异黄酮的提取纯化、单体分离和抗氧化的生物活性。研究了加压溶剂法和亚临界水法提取红三叶草总异黄酮，并对两种方法进行比较分析。通过单因素及正交试验确定加压溶剂法提取红三叶草总异黄酮的最佳工艺条件为：提取温度125℃、提取时间5min、提取压力1.6MPa、液固比25ml/g，乙醇浓度70%，红三叶草总异黄酮最终粗得率为49.58mg·g-1。通过单因素及正交试验确定亚临界水法提取红三叶草总异黄酮的最佳工艺条件为：提取温度120℃、提取时间15min、提取压力1.4MPa、液固比50ml/g，红三叶草总异黄酮最终粗得率为33.61mg·g-1。研究结果表明加压溶剂法提取率高于亚临界水法。研究了大孔树脂法纯化红三叶草总异黄酮的方法。通过静态吸附与解析试验研究了5种大孔吸附树脂的吸附效果，结果表明AB-8对红三叶草总异黄酮的综合性吸附效果最好。选取70%浓度乙醇作为洗脱液，用AB-8大孔吸附树脂进行动态试验，得到最佳纯化条件为：选择上样液浓度为0.2173mg/mL，样液体积为3BV，进样流速为1mL/min，洗脱液体积为2BV，洗脱流速为2mL/min，在以上条件下异黄酮回收率为96.61%，大孔树脂纯化前黄酮粗提液纯度为5.03%，纯化后样品纯度为65.58%。应用高速逆流色谱法对经过大孔树脂纯化的红三叶草异黄酮进行再次纯化，分离出芒柄花黄素和鸡豆黄素，确定最佳溶剂体系为：正己烷：氯仿：甲醇：水=1.5:3:3:2；HSCCC分离操作参数：主机温度为30℃，主机转速为900r/min，流动相流速为2mL/min，样品浓度5.26mg/mL。在上述条件下得到的芒柄花黄素和鸡豆黄素的纯度分别为92.87%和83.48%。研究了芒柄花黄素和鸡豆黄素清除超氧自由基、清除羟自由基、清除DPPH能力及其还原能力。研究结果表明，芒柄花黄素和鸡豆黄素的抗氧化能力随浓度的增大逐渐增大；相同浓度下，鸡豆黄素的抗氧化能力高于芒柄花黄素。