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体外受精(in vitro fertilization, IVF)是一项应用最为广泛的辅助生殖技术(assisted reproductive technology, ART)。卵母细胞质量和精子浓度在精卵结合过程中起到至关重要的作用,然而由于一些疾病或是自身排卵原因,亦或是取卵过程中人为操作的原因,临床上经常会获得无卵丘包裹的卵母细胞称为裸卵,(Denuded Oocyte, DO)甚至是无透明带的卵母细胞(Oocyte Zona pellucida Free, OZ-)。虽然围绕卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complex, COC)开展了许多研究,但对于DO或OZ-的卵子能否受精,以及受精的最佳精子浓度等问题,尚无系统报道。本研究以小鼠为实验对象,获得体内成熟的COC,用透明质酸酶去除卵丘获得DO,以及利用酸性M2操作液去除透明带获得OZ-,对于这三种在结构上逐步递减的卵母细胞进行了如下实验,以确定受精时的最佳精子浓度：1：将同一类型的卵母细胞与不同浓度的精子混合,确定每一类型卵母细胞的最佳受精精子浓度；2、将同一浓度的精子与不同类型的卵母细胞混合,以确定每一精子浓度梯度最适合的卵母细胞类型。我们的实验结果显示：对于体内成熟的COC,IVF最适精子浓度为106个/ml；对于DO,IVF最适精子浓度为107个/ml；而对于体内成熟的OZ-,IVF最适精子浓度为107个/m1。精子浓度为103个/ml或104个/ml时,体内成熟的DO获得最高的受精率和胚胎发育率；精子浓度为105个/ml或106个/ml时,体内成熟的COC获得最高的受精率和胚胎发育率；精子浓度为107个/ml时,OZ-获得最高的受精率。我们使用以上最适浓度的精子分别使COC、DO、OZ-体外受精后,获得的囊胚免疫荧光染色统计囊胚细胞数和直径,测量的结果表明COC组与DO组间没有显著差异,这两组显著高于OZ-组。综上所述,COC在106个/ml精子浓度下受精率和胚胎发育率最高,但是如果不能获得足够的COC,可以使用DO进行体外受精,DO的最适精子浓度为107个/m1。因为OZ-后期的胚胎发育率极低,所以不建议使用OZ-用于体外受精操作。