Cfr蛋白是由cfr基因编码的甲基转移酶,它能与多种药物作用的靶点结合从而介导五类药物耐药。在不同国家、地区的人源和动物源细菌中均发现了cfr基因,其携带率有逐年增加的趋势,它的出现和流行给临床医学和公共卫生学带来了潜在的危害,引起了人们的高度关注。目前cfr基因阳性菌的监测方法主要是普通PCR法,但监测的结果只能表明该细菌是否含有cfr,基因,而无法确定cfr基因是否表达了Cfr蛋白,无法进一步为合理用药和风险评估提供依据。因此,从免疫学方面探索建立对Cfr蛋白的监测方法就显得十分重要。通过制备重组蛋白Cfr的单克隆抗体；再以制得的单抗为一抗,用Western blot方法对临床肠球菌进行检测,达到为建立监测cfr基因阳性菌的免疫学方法提供理论依据的目的。本研究以实验室保存的纯化的重组蛋白Cfr为免疫原,对BALB/c小鼠进行免疫。初次免疫时将弗氏完全佐剂与抗原60μg(50μg-100μg均可)进行等体积混合,充分乳化后,再皮内分点注射；一个月后对小鼠进行加强免疫,其抗原量、注射体积均不变,但改为用弗氏不完全佐剂和皮下注射的方式；此后每间隔两周加强免疫一次,四免后分离小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行融合,并用HAT选择性培养基进行培养(用小鼠腹腔巨噬细胞作为滋养细胞)；以纯化的重组Cfr蛋白为包被原,用间接ELISA方法检测杂交瘤细胞培养上清,将选出的阳性杂交瘤细胞进行克隆化培养；经过三次及以上亚克隆后成功获得了1株能够稳定分泌针对重组蛋白Cfr的高效价单抗的杂交瘤细胞克隆(Cfr-D9)。通过检测发现这株单抗能特异性的结合重组蛋白Cfr,并且有较高的效价(腹水效价1：243000)。亚类鉴定结果表明这株单抗的亚类为IgG2a。以制备的单抗为一抗,用Western blot的方法对16株临床阳性肠球菌和5株临床阴性肠球菌进行分析。结果表明,制备的单抗能特异性的识别临床阳性肠球菌菌株中的Cfr蛋白；还发现在用等蛋白量进行检测的情况下,16株阳性肠球菌的着色带有粗有细,推测临床阳性肠球菌菌株在同样的表达条件下,细菌所表达的Cfr蛋白量有差异。另外,还发现阳性肠球菌菌株所表达的Cfr蛋白量与菌株的不同地区来源、不同的分离部位、不同的克隆型没有直接的关系。但目前还没有从分子机理方面对上述情况进行研究。综上所述,成功制备了单克隆抗体；并以该单抗为一抗,用Western blot方法成功对21株临床肠球菌菌株进行了检测,证明了实验制得的单克隆抗体有比较好的特异性。实验初步建立了用Western blot方法来检测临床菌株表达的Cfr蛋白,为探索建立更多的免疫学方法来监测临床菌株中的Cfr蛋白提供了理论依据。