【摘 要】
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食源性致病菌所导致的食品安全事件频发,而沙门氏菌感染在食源性细菌暴发中排名第一。快速、灵敏的检测技术是预防食源性疾病暴发的关键,然而目前存在的检测技术如传统的微生物培养法、表面等离子体共振、免疫法等不能满足快速高效的检测需求。为了解决检测技术存在的问题,更好的保证食品安全,本论文研究聚酰胺-胺树状大分子钆特异性探针的制备工艺并用于乳制品中沙门氏菌的快速检测。研究设计以顺磁性纳米金属粒子Gd3+作为
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食源性致病菌所导致的食品安全事件频发,而沙门氏菌感染在食源性细菌暴发中排名第一。快速、灵敏的检测技术是预防食源性疾病暴发的关键,然而目前存在的检测技术如传统的微生物培养法、表面等离子体共振、免疫法等不能满足快速高效的检测需求。为了解决检测技术存在的问题,更好的保证食品安全,本论文研究聚酰胺-胺树状大分子钆特异性探针的制备工艺并用于乳制品中沙门氏菌的快速检测。研究设计以顺磁性纳米金属粒子Gd3+作为磁信号物质,采用高度支化、高度对称以及高官能团密度的新型纳米材料树状大分子聚酰胺-胺（PAMAM）作为探针骨架,利用链霉亲和素-生物素信号放大系统将抗体和磁性复合物进行结合得到免疫探针。免疫探针通过抗原-抗体相互作用捕获沙门氏菌,然后通过膜过滤将其从混合物中分离出来。最后,通过核磁共振检测滤液的纵向弛豫信号变化来实现对目标菌的检测。主要研究内容如下:1、高弛豫效能的探针结构设计与制备工艺研究。设计采用高度支化、高度对称以及高官能团密度的新型纳米材料树状大分子聚酰胺-胺（PAMAM）作为探针骨架合成免疫探针,并对探针的主要合成条件进行优化。结果表明Biotin-PAMAM的最佳合成条件为以1:5的摩尔比,在25℃条件下反应2 h。PAMAM-DTPA的最佳合成条件为:DTPA与PAMAM摩尔比为40:1,合成温度37℃,缓冲体系p H为9,反应时间3 h。为了验证引入PAMAM材料后探针对水质子的纵向弛豫时间的影响效果是否增强,分别对Biotin-PAMAM-DTPA-Gd和DTPA-Gd进行纵向弛豫时间T1值的测定。结果表明发现引入PAMAM材料后Biotin-PAMAM-DTPA-Gd的纵向弛豫率r1=9.87 m M-1s-1约为DTPA-Gd的2.3倍,说明PAMAM材料的引入能够增强探针与水质子的相互作用,能够增大分子质量进而增强探针的弛豫率。2、构建对沙门氏菌的检测系统。为实现对目标菌特异性及快速的检测,对检测系统中主要条件如SA用量、生物素化抗体的用量、Biotin-PAMAM-DTPA-Gd复合物用量以及探针对目标菌捕获时间分别进行优化。结果表明:在SA用量为4μL、生物素化抗体的用量摩尔比为1:5、Biotin-PAMAM-DTPA-Gd复合物用量为100μL、探针对目标菌捕获时间50 min条件下探针的信号输出较为稳定,更有利于目标菌的捕获。3、检测系统在牛乳中的应用研究。为了保证探针的实际检测效果,对探针的特异性和抗干扰能力、检测灵敏度、在牛乳中的检测效果进行评估。结果表明探针能在干扰菌存在条件下特异性的对沙门氏菌进行捕获,在PBS缓冲溶液和牛奶中都能检测到10~3CFU/m L的沙门氏菌。
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