抗猪圆环病毒2型卵黄抗体的研制及效果的研究

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本研究制备了抗猪圆环病毒2型特异性卵黄抗体,研究了抗体体外和小鼠体内抑制病毒增殖的能力。主要研究内容如下:1.抗猪圆环病毒2型特异性卵黄抗体的制备选取32只22周龄健康产蛋鸡,随机分为4组,每组8只,每只为一个重复。对照组注射生理盐水,试验组1:用灭活的PCV2与弗氏佐剂乳化后逐次增加剂量免疫蛋鸡;试验组2:用灭活的PCV2与弗氏佐剂乳化后保持相同剂量免疫蛋鸡;试验组3:用PCV2免疫蛋鸡;共免疫五次。用ELISA和胶体金两种方法检测蛋鸡血清抗体和卵黄抗体水平,水稀释-硫酸铵一次盐析-二次盐析-透析-浓缩提取IgY, BCA法检测每一次提取后所获得的蛋白浓度,SDS-PAGE检测各步骤提取后IgY纯度。结果表明:各试验组蛋鸡的血清抗体水平始终高于卵黄抗体水平,试验组1所获得的抗体效价最高,最高效价可达到1:640,并且持续时间较长,持续时间可达8周以上;通过水稀释-硫酸铵一次盐析-二次盐析-透析-浓缩各步骤提取,每10 ml卵黄液最终可获得卵黄抗体51.67 mg;经SDS-PAGE检测,杂带较少,抗体纯度较高o2.抗猪圆环病毒卵黄抗体的体内外中和试验IgY的最大无毒作用浓度的研究:在96孔细胞培养板中,将卵黄抗体倍比稀释成不同浓度,加入长成良好的细胞,用倒置显微镜观察细胞病变情况;IgY体外中和试验:将卵黄抗体倍比稀释成不同浓度,与200 TCID50的PCV2体外中和1 h后加入长成良好的细胞,培养48 h后收集细胞,提取病毒DNA,通过实时荧光定量PCR测定病毒的拷贝数;IgY体内中和试验:选取30只8周龄SPF级BALB/c小鼠,分为3组,阴性对照组:腹腔注射生理盐水,0.5 ml/只;试验组:IgY与PCV2(107TCID50/ml)中和一个小时后腹腔注射,0.5 ml/只;阳性对照组:腹腔注射PCV2(107TCID50/ml),0.5 ml/只,于7 d、14 d采集血液和组织,检测小鼠体内病毒复制情况和血清抗体水平。IgY细胞毒性试验结果表明:IgY不引起细胞产生CPE,但会促进细胞的生长,产生细胞堆积,并且随着IgY浓度的降低,堆积现象逐渐减少,当IgY浓度为0.9 mg/ml时,堆积现象消失;IgY体外中和试验表明:当IgY的浓度为225μg/ml时,阳性对照组和试验组细胞中PCV2的拷贝数存在显著差异,处理组IgY抑制了病毒的复制,并且随着IgY浓度的增加,病毒的拷贝数逐渐降低;IgY体内中和试验结果表明:当IgY浓度为100 mg/ml时,IgY能够明显抑制小鼠组织中PCV2的增殖。
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