自从1990年W.Denk等人第一次将双光子激发技术引入到荧光显微镜后,双光子荧光显微成像成为最早在实践中得到广泛应用的双光子技术,同时也带动了双光子光动力学疗法的研究热潮。但是它们所面临的一个共同难题为尚缺乏具有高效的双光子吸收特性的染料与之匹配。目前所用的大部分染料仍为传统的单光子荧光材料,它们的双光子吸收截面小,荧光量子产率低,在水溶液中容易猝灭。故双光子材料的滞后发展已影响了双光子荧光显微镜与共聚焦荧光显微镜的竞争力,也严重影响肿瘤光动力学疗法的临床应用范围与疗效提高。本研究突破传统单光子荧光染料的局限,对经典的双光子材料DPA-DSB在结构上进行改型,设计一种新型的具有大的双光子吸收截面的有机分子体系DPA-TSB,利用再沉淀法制备成DPA-TSB水相分散纳米粒子,在提高活性染料的填充密度,增强生物荧光成像灵敏度的同时,避免了因加入其它载体或表面活性剂而导致的纳米粒子细胞毒性增加的弊端。同时,借助共聚焦激光扫描显微镜可在活体细胞纵深成像的优势,将双光子纳米粒子作为新型荧光探针,探讨其被肿瘤细胞摄取、在肿瘤细胞中荧光成像的功能以及细胞毒性判定,探讨采用双光子荧光探针对胃癌早期诊断及靶向治疗的新方法,为双光子光动力学疗法的临床应用研究做前期准备。共聚焦激光显微内镜(Confocal laser microendoscopy,CLE)是近年来出现的一项新型内镜检查技术,目前尚处于临床科研起步阶段。它将微型化的共聚焦激光显微镜整合至电子内镜头端,在进行普通白光内镜检查的同时可通过共聚焦激光扫描技术进行显微镜检查,实现了活体成像由宏观向微观的纵深发展。共聚焦激光显微内镜所特有的高达1000倍的高分辨率放大图像,深达2 50μm的光学断层扫描,不仅可以观察粘膜上皮细胞亚细胞等微细结构,也使得活体下实时观测粘膜内不同平面组织细胞结构成为可能,被称为无创“光学活检”、“细胞CT”扫描。本研究对经普通内镜检查可疑胃癌的患者,行共聚焦激光显微内镜检查,利用其可实现活体组织细胞实时成像的优势,观察在体胃癌细胞形态、肿瘤组织结构及微血管形态等变化,并行多部位活检,探讨共聚焦内镜对胃癌诊断的敏感性与特异性,“光学活检”与病理诊断的一致性,评估无创光学活检是否有取代有创病理活检的趋势。结果表明,通过获取大量多部位的、具有高分辨率、放大的共聚焦图像,与病理诊断金标准对比研究,得出共聚焦无创光学活检诊断胃癌的敏感性与特异性分别为96%、77%,经一致性检验,与有创病理活检相比具有很高的一致性(Kappa=0.78,Kappa>0.75);通过探讨不同类型癌前病变及同一病变不同时期在体实时共聚焦图像的特点和图像解读,可提高共聚焦内镜在临床肿瘤筛查、癌前病变动态随诊或早期癌靶向活检的应用价值。